Vladimír Celer VFU Brno
Mikrobiologické vyšetření Přímý průkazNepřímý průkaz - sérologie Kultivace Mikroskopie PCR, RT-PCR, qPCR… ELISA (antigen capture) Imunohistochemie In-situ testy sekvenování ELISA Imunoblot Imunodifuzní test Rychlé chromatografické testy Hemaglutinační test
Akreditované laboratoře Český institut pro akreditaci (ČIA) Akreditovaná = důvěryhodná Management kontroly kvality Systémová i odborná kontrola Velká zátěž pro laboratoř (finanční, práce) Vyšší cena vyšetření
Přímý průkaz Jednoduché stanovení diagnózy Možnost typizace, sekvenování Nevhodné pro „ubikvitární“ viry (cirkoviry, aviární leukóza, Markova choroba…) Jediné vyšetření - FeLV Náročné na odběr a uchování vzorku
Přímý průkaz Správný odběr a zpracování vzorku Časově, množství a typ vzorku Transport Teplota transportu a skladování Anamnéza
Kdy odebírat vzorky? Viremie IgM IgG
Úskalí molekulárních metod Know -how Detailní znalost genomu Validace protokolu (specifita, senzitivita) Náchylnost k nespecificky pozit. výsledkům
Sekvenování Vhodný úsek genomu Dostatečný počet čtení Typizace kmenů viru Odlišení vakcinačních a terénních kmenů
Vaiabilita PRRS viru (ORF5)
Variabilita viru PRRS (Nsp)
Nepřímá diagnostika Často stájová diagnostika Výjimečně definitivní dg. (lentiviry), někdy nutné párové vzorky Nevhodné pro „ubikvitární“ viry (cirkoviry, aviární leukóza, Markova choroba… ale i FeLV..) Obtížná typizace Jednoduchý odběr a uchování vzorku (sérum, sliny, CSF)
Dynamika tvorby protilátek
Nepřímé ELISA testy 1. generace Kultivace virů, bakterií 2. generace Rekombinantní proteiny 3. generace Peptidové antigeny
Interpretace ELISA Stanovení cut off hodnoty Rozložení absorbancí negativních sér Rozložení absorbancí pozitivních sér 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 absorbance
Imunoblot
Rychlé imunochromatografické testy