Imunofluorescence Nepřímá Přímá slouží k průkazu protilátek (Ab)

Prezentace na téma: "Imunofluorescence Nepřímá Přímá slouží k průkazu protilátek (Ab)"— Transkript prezentace:

1 Imunofluorescence Nepřímá Přímá slouží k průkazu protilátek (Ab)
slouží k průkazu antigenů (Ag) protilátka proti Ab+ barvička Ab+ fluorescenční barvička (hotová) sérum (IgG) sérum (Ag) Ag (hotový)

2 Imunofluorescence Úkol 1 a 2

3 ELISA I. (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)
Slouží k průkazu antigenů i protilátek

4 ELISA k průkazu antigenů
změna barvy + - Substrát Ab značená enzymem Sérum s Ag Sérum bez Ag Ab vázaná v důlku

5 ELISA II. – průkaz protilátek
Prokazujeme třídy protilátek – IgM, IgA, IgG !!! IgM a IgA jsou znakem akutní infekce IgG obecně = prodělané infekce, ale !! existují nízkoavidní IgG – vazba těchto protilátek v reakci není pevná, lze ji rozrušit ureou (výskyt v časnější fázi infekce)

6 ELISA k průkazu protilátek - obecně
+ - Substrát Ab proti protilátce značená enzymem Sérum s Ab Sérum bez Ab Ag na dně

7 ELISA k průkazu tříd protilátek – vazná (capture)
+ - Substrát Ab proti protilátce značená enzymem Ag (hotový) Sérum bez Ab/jinou Ab než hledanou Sérum s Ab (IgM/IgG) Ab proti IgM//IgG vychytává všechny IgM/IgG ve vzorku

8 Westernblot (k průkazu Ab)
Příprava Ag ELFO gelová Rozštěpení DDS Ag Přesátí Rozstříhání Proužky

9 Westernblot Vazba Ab na Ag + sérum s protilátkami (Ab)
OspC + sérum s protilátkami (Ab) Hotový proužek s Ag (BmpA, OspC, p39 aj.) vzorek šablona Alespoň 2 proužky shodné se šablonou = výskyt protilátek Výjimka:pl proti OspC u IgM stačí pl proti vlsE u IgG proužek

10 Šablona k úkolu č. 5 OspC je vysoce specifické
jsou-li IgM proti OspC přítomny = akutní infekce, netřeba hledat IgM proti jiným antigenům