Detekce proteinů na preparátech Histochemie. Metody detekce – vazba cílového proteinu Imunologické; primární protilátky sekundární protilátky Imunologické;

Prezentace na téma: "Detekce proteinů na preparátech Histochemie. Metody detekce – vazba cílového proteinu Imunologické; primární protilátky sekundární protilátky Imunologické;"— Transkript prezentace:

1 Detekce proteinů na preparátech Histochemie

2 Metody detekce – vazba cílového proteinu Imunologické; primární protilátky sekundární protilátky Imunologické; primární protilátky sekundární protilátky Malé molekuly; molekuly vážící náš cílový protein Malé molekuly; molekuly vážící náš cílový protein Proteiny; proteiny s interakcí s cílovým proteinem Proteiny; proteiny s interakcí s cílovým proteinem

3 Metody vizualizace - označení molekuly vážící cílový protein Fluorescence; malé excitovatelné fluorescenční molekuly Fluorescence; malé excitovatelné fluorescenční molekuly Enzym; enzymy s barevnou reakcí po přidání substrátu Enzym; enzymy s barevnou reakcí po přidání substrátu

4 Metody vizualizace - označení molekuly vážící cílový protein Fluorescence; malé excitovatelné fluorescenční molekuly Fluorescence; malé excitovatelné fluorescenční molekuly Enzym; enzymy s barevnou reakcí po přidání substrátu Enzym; enzymy s barevnou reakcí po přidání substrátu

5 Metody vizualizace - označení molekuly vážící cílový protein Fluorescence; malé excitovatelné fluorescenční molekuly Fluorescence; malé excitovatelné fluorescenční molekuly Enzym; enzymy s barevnou reakcí po přidání substrátu eg. Alcaline phosphatase (AP) Enzym; enzymy s barevnou reakcí po přidání substrátu eg. Alcaline phosphatase (AP)

6 Aktin – hlavní složka cytoskeletu zodpovědná za pohyb Dvě formy: G-aktin - jedna molekula F-aktin - polymerovaný Dvě formy: G-aktin - jedna molekula F-aktin - polymerovaný Spolupráce s myosinem Spolupráce s myosinem Síť skrz cytoplasmu Síť skrz cytoplasmu Dynamika aktinu je nezbytná pro životní funkce Dynamika aktinu je nezbytná pro životní funkce

7 Phalloidin Jed z Amanita phalloides Jed z Amanita phalloides Specificky váže F-actin Specificky váže F-actin Může být spojen s excitabilní molekulou bez ztráty vazby Může být spojen s excitabilní molekulou bez ztráty vazby

8 DAPI - Fluorescenční dsDNA značka Váže dsDNA v malém žlábku pomocí interkalace Váže dsDNA v malém žlábku pomocí interkalace To zvyšuje schopnost vyzařovat světlo To zvyšuje schopnost vyzařovat světlo Excitace UV Excitace UV Emise modrá Emise modrá

9 Dvojí značení, aktinový cytoskelet a DNA Složený obraz phalloidin-TRITC (červeně) and DAPI (modře)

10 Dvojí značení, aktinový cytoskelet a DNA Obraz phalloidin-TRITC (červeně) and DAPI (modře)