Prezentace se nahrává, počkejte prosím

Prezentace se nahrává, počkejte prosím

RxFISH. RxFISH =fluorescenční in situ hybridizace (rainbow = duha) - 1997, skupinou kolem profesora Malcolma Fergusona Smitha - jedna z nedávných pokroků.

Podobné prezentace


Prezentace na téma: "RxFISH. RxFISH =fluorescenční in situ hybridizace (rainbow = duha) - 1997, skupinou kolem profesora Malcolma Fergusona Smitha - jedna z nedávných pokroků."— Transkript prezentace:

1 RxFISH

2 RxFISH =fluorescenční in situ hybridizace (rainbow = duha) , skupinou kolem profesora Malcolma Fergusona Smitha - jedna z nedávných pokroků ve FISH technologii - mnohobarevná pruhovací chromozomová analýza - sondy se vyrábějí z giboní chromozomální DNA; využívá se vysokého stupně homologie genomu

3 Mnohobarevné FISH techniky M FISH , Speicher - každý chromozom odlišen určitou barvou SKY FISH , Schröcková - každý chromozom odlišen určitou barvou - 24 chromozomově specifických celochromozomových sond, které byly vytvořeny na základě kombinačního značení za použití 5 různých fluorochromů

4 Metodický postup 1. Příprava kvalitního preparátu 2. Zestaršení preparátu – inkubace v 2x SSC a dehydratace ve vzestupné alkoholové řadě 3. Permeabilizace – odstranění cytoplazmy, zlepšení průniku DNA sond (pepsin, alkoholová řada) 4. Denaturace cílového místa – denaturace 70% formamidu + 2x SSC, dehydratace v ledové vzestupné etanolové řadě 5. Příprava a denaturace sondy

5 6. Hybridizace DNA sondy na cílový preparát – uzavření rámováním a inkubace ve vlhké komůrce 7. Omytí nespecificky navázané sondy 8. Barvení pozadí – DAPI 9. Detekce fluorescenčním mikroskopem 10. Vyhodnocení a zpracování signálu

6 Výhody Rx FISH - detekce těžko postižitelných intrachromozomálních (mikrodelece, duplikace,inverze...) - interchromozomálních translokací - interpetace markerových chromozomů - vzorky se špatnou morfologií - možnost rozlišení mezi p a q ramenem

7 Nevýhody Rx FISH - schopnost rozlišit asi jen 100 pruhů na haploidní karyotyp (narozdíl od G-pruhování, které rozliší 400 až 550 pruhů) - některé pruhy se překrývají, nelze rozlišit např. 8q od 21q; 6q od 13q,17q a X   používá se v kombinace s  G-pruhováním

8 Kombinace Rx FISH a G-pruhování

9 Aplikace Rx FISH - vůbec první využití k popisu chromozomálních přesmyků v nádorech u T-prolymfocytární leukémie - T-lymfocyty mají charakteristickou morfologii, velmi časté jsou abnormality karyotypu – obvykle komplexy s mnohonásobnými přesmyky inv(14)(q11,q32)t(14,14)(q11,q32)t(X,14)(q28,q11)i(8)(q10)t(8,8)(p21,q11)

10 - Rx FISH metoda umožnila identifikovat nové aberace, které nebyly možné odhalit konvenčním barvením - kombinace Rx FISH a G-pruhování umožňuje přesnou karyotypizaci např. solidních tumorů, leukémií atd.


Stáhnout ppt "RxFISH. RxFISH =fluorescenční in situ hybridizace (rainbow = duha) - 1997, skupinou kolem profesora Malcolma Fergusona Smitha - jedna z nedávných pokroků."

Podobné prezentace


Reklamy Google