Prezentace se nahrává, počkejte prosím

Prezentace se nahrává, počkejte prosím

Histologická technika D. Kylarová. Způsoby vyšetření cytologické vyšetření exfoliativní cytologie aspirační cytologie histologické vyšetření biopsie.

Podobné prezentace


Prezentace na téma: "Histologická technika D. Kylarová. Způsoby vyšetření cytologické vyšetření exfoliativní cytologie aspirační cytologie histologické vyšetření biopsie."— Transkript prezentace:

1 Histologická technika D. Kylarová

2 Způsoby vyšetření cytologické vyšetření exfoliativní cytologie aspirační cytologie histologické vyšetření biopsie

3 Cytologický preparát

4 Histologický preparát

5 Zpracování tkání - histologie OdběrFixaceKrájení tkáně prosycené parafínem tkáně prosycené parafínem zmrzlé tkáně zmrzlé tkáněBarvení

6 Odběr BiopsiePunkceExcizeKyretáž Peroperační biopsie NekropsiePostup: Oddělení vzorku - velikost tkáňového bločku max 1cm 2 Oddělení vzorku - velikost tkáňového bločku max 1cm 2 Oplach va fyziologickém roztoku Oplach va fyziologickém roztoku Vložení do fixační tekutiny - ihned po odběru !!! Vložení do fixační tekutiny - ihned po odběru !!! Označení vzorku Označení vzorku

7 Fixace Def.: rychlá a šetrná denaturace bílkovin bránící autolýze tkání Podmínky fixace Rychlost - odběr, průnik, velikost vzorku (1cm 2, 1mm 2 ) Rychlost - odběr, průnik, velikost vzorku (1cm 2, 1mm 2 ) Zachování struktury Zachování struktury Barvitelnost Barvitelnost Fixace fyzikální Fixace chemická – fix. tekutiny:

8 Fixační tekutiny formaldehyd (10% formol, neutrální nebo pufrovaný) Bouinova t. (formol + k. pikrová) Zenkerova t. (dvojchroman draselný, sublimát, formol) metacarn (formol, metanol, voda) oxid osmičelý, glutaraldehyd

9 Krájení parafínových řezů Odvodnění - vzestupná etanolová řada Projasnění - xylen Prosycení parafínem Zalití do parafínu Krájení na mikrotomu (tloušťka řezu 4-10  m Rotační x sáňkový mikrotom Lepení řezů na podložní skla

10 ODVODNĚNÍ ŘEZŮ

11 XYLEN

12 PROSYCENÍ PARAFINEM I

13 PROSYCENÍ PARAFINEM II

14 ZALÉVÁNÍ II

15 ZALÉVÁNÍ III

16 Krájení zmrazených tkání Zmrazovací mikrotom, kryostat Použití: Peroperační biopsie Průkaz enzymů Barvení tuků Imunohistochemie

17 Barvení parafínových řezů HE OdparafínováníZavodnění Barvení hematoxylinem Praní v tekoucí vodě Barvení eosinem OdvodněníProjasněníMontování

18 Elektronová mikroskopie Princip: emitované elektrony procházejí preparátem, po jejich dopadu na fluorescenční stínítko vzniká obraz (obdoba SM) Zpracování tkáně Odběr (supravitální, velikost vzorku max 1mm2) Odběr (supravitální, velikost vzorku max 1mm2) Fixace dvoustupňová (glutaraldehyd, OSO4) Fixace dvoustupňová (glutaraldehyd, OSO4) Odvodnění (aceton) Odvodnění (aceton) Prosycení (směs epox. pryskyřice s tužidlem) Prosycení (směs epox. pryskyřice s tužidlem) Vytvrzení a zalití (epoxidové pryskyřice, metakryláty) Vytvrzení a zalití (epoxidové pryskyřice, metakryláty) Krájení (ultramikrotomy – 30 – 60nm) Krájení (ultramikrotomy – 30 – 60nm) Přenesení na nosné terčíky Přenesení na nosné terčíky Kontrastování (uranyl acetát) Kontrastování (uranyl acetát) Transmisní elektronový mikroskop

19

20 Elektronová mikroskopie Řezy krájené na ultramikrotomu za účelem prohlížení v SM Využití - orientace v bloku před vyšetřením v TEM - studium cytologických detailů v SM (!Fixace!) - studium cytologických detailů v SM (!Fixace!) řezy silné 0,5-1  m se přenesou na podložní sklo a barví se roztokem toluidinové modři (popř. azur…) Polotenké řezy

21

22 Elektronová mikroskopie Princip: úzký svazek elektronů projíždí preparát, odražené elektrony na stínítku dávají plastický obraz Zpracování tkáně Odběr (může být i větší vzorek než pro TEM) Odběr (může být i větší vzorek než pro TEM) Fixace Fixace Odvodnění (šetrné vysušení za zvýšeného tlaku a teploty) Odvodnění (šetrné vysušení za zvýšeného tlaku a teploty) u tvrdých tkání (zub, kost) tento bod vynecháme Pokovení (naprášení kovových častic na povrch) Pokovení (naprášení kovových častic na povrch) Rozlišovací schopnost do x Rastrovací elektronový mikroskop

23

24 Díky za pozornost Díky za pozornost


Stáhnout ppt "Histologická technika D. Kylarová. Způsoby vyšetření cytologické vyšetření exfoliativní cytologie aspirační cytologie histologické vyšetření biopsie."

Podobné prezentace


Reklamy Google