Základy vícebarevné cytometrie v diagnostice 2015 Standardizace měření v průtokové cytometrii Martin Špryngar Exbio Praha a. s.

Zpracování vzorku Měření vzorku Analýza dat Interpretace dat Standardizace v průtokové cytometrii Vzorek Závěr

Standardizace měření = porovnatelná data v dlouhodobém horizontu naměřená na jednom cytometru naměřená na různých cytometrech naměřená na různých cytometrech v různých laboratořích Visací Zámek 1982 – 2007, Jan Houbert: „Jsme tenkrát nevěděli, že kytary se mají ladit...někdo nám pak řekl, že se mají ladit, ale to jsme zase netušili, že i nějak jako vzájemně. Takže všechny ty písničky byly takový originály.“

Nástroje standardizace měření na průtokovém cytometru 1. Definice cílových hodnot fluorescence standard 2. Udržení cílových hodnot fluorescence změnou PMTV

Postup standardizace měření pro daný experiment Charakterizace cytometru Optimalizace na měřený vzorek Změření a zaznamenání cílových hodnot fluorescence Převedení PMTV do instrument settings – dále application setting Změření kompenzačních kontrol Akvizice experimentu

Definice Cílových hodnot MFI

Udržení cílových hodnot MFI Den xDen 1Den V403V 564 V 554V 403V

Udržení cílových hodnot MFI Zajištění reprodukovatelnosti měřených dat změnou PMTV 1) Automaticky - Platformy výrobců (CS&T, FlowCheck+FlowSet) 2) Manuálně – „monitoring“ (EuroFlow) Data změřená dnes stejně jako za týden, měsíc, rok… = porovnatelná data v dlouhodobém horizontu

Platforma Beckman Coulter

Platforma BD Biosciences Cytometer Set-up & Tracking (CS&T) System

CS&T modul v Diva + Application Settings Baseline = charakterizace cytometru Performance Check = Denní kontrola kvality = ∆PMTV nutná k zachování Cílových MFI Application settings = Standardizace konkrétní aplikace = set hodnot PMTV (Instrument settings), při kterých jsou dosaženy požadované fluorescence, = modifikace pro danou aplikaci

CS&T modul: Baseline a linearita měření

Baseline - zobrazení jako funkce PMTV

CS&T modul: Baseline = min PMTV pro optimální rozlišení signálu od šumu Baseline definuje okno pro optimalizaci PMTV pro konkrétní aplikaci (setup)

CS&T modul: Baseline = min PMTV pro optimální rozlišení signálu od šumu Baseline definuje okno pro optimalizaci PMTV pro konkrétní aplikaci (setup)

Linearita - zobrazení jako funkce PMTV

Stand. měření mezi cytometry/mezi laboratořemi 1.Definice cílových hodnot MFI 2.Udržení cílových hodnot MFI NAVIOSCANTO + NAVIOS CD3 FITC CD4 PE CANTO

Výkon laseru a linearita měření Medián bright bead populace byl umístěn do stejného FL kanálu = Cílová hodnota MFI

Děkuji za pozornost