Pilotní studie reziduí amoxicilinu ve tkáních prasnic po injekčním podání , Hradec KrálovéPokludová L., Střechová V.

prokázat, zda u vybraných injekčních přípravků s krátkou ochrannou lhůtou (OL) dochází při jejím dodržení k nálezům převyšujícím maximální limit reziduí (MRL) zaměřena na zjišťování reziduí amoxicilinu a dalších betalaktamů po injekční aplikaci veterinárních léčivých přípravků, s obsahem těchto účinných látek, ve tkáních vyřazených prasnic Cíl a zaměření studie

Proč právě amoxicilin ? dlouhodobě hojně používaná účinná látka účinná látka ve formě tzv. „LA“ suspenzí s prodlouženým uvolňováním (LA = long acting) potenciál k alergizaci i po expozici reziduím (Reyns, 2008a ) nově předložené studie na prasatech vyšších váhových kategorií indikovaly nutnost prodloužení OL Velké rozpětí OL (11 – 50 dnů) u registrovaných přípravků dostupných na CZ (i EU) trhu

Cílová zvířata pro odběry aneb … Proč právě prasnice? Prasnice jsou zástupci tzv. nejhoršího možného scénáře z pohledu perzistence reziduí - nejvyšší váhová kategorie - největší aplikovaný objem přípravku celkově (tj. přepočet účinné látky na kg ž.hm) na jedno (většinou ale více) aplikační/ch míst/o - pokud v minulosti byly nálezy (např DHSTM), pak u této kategorie -jsou zatíženy často terapií VLP s antibiotiky -jsou dostupná identifikační data k jednotlivým zvířatům

Problém ? ? => různé OL x bezpečnost konzumenta OL ( Definice zákon o veterinární péči ): Období mezi posledním podáním léčivého přípravku zvířatům za běžných podmínek používání příslušného přípravku a okamžikem, kdy lze od těchto zvířat získávat potraviny tak, aby bylo zajištěno, že tyto potraviny neobsahují rezidua v množstvích přesahujících maximální limity reziduí (MRL) stanovené zvláštními právními předpisy a předpisy Evropských společenství MRL Maximální koncentrace rezidua farmakologicky účinné látky (PAS), kterou lze povolit v potravinách živočišného původu

Ochranná lhůta x běžné podmínky správné veterinární praxe „běžné podmínky podání“ v souladu s SPC tj. dodržení: Cílový druh (včetně váhové/věkové/produkční kategorie … např. sele vs. prasnice) Dávkování a doba podávání Místo podání + max objem na jedno aplikační místo (místo vpichu) Způsob aplikace (injekční přípravky: z pohledu reziduí v místě inj. podání: i.m. + s.c.) Zvážit také Onemocnění zvířete (např. změna metabolismu jater, ledvin v důsledku onemocnění, prasnice stresové poporodní stavy atp.)

Stanovení ochranné lhůty Statistická metoda (statistical approach) – výpočet OL pro každou poživatelnou tkáň; výsledná OL je stanovena dle tkáně s nejdelší deplecí. – Předpokladem je studie reziduí uskutečněná dle VOLUME 8: – Programy pro výpočet OL WT 1.4 meat a WT 1.4 milk – ke stažení na stránkách EMEA Alternativní metoda (non-statistical approach) – zejména u starých substancí, všechny tkáně pod MRL, „safety span“ (pohybuje se mezi 10 až 30 %) pro kompenzaci faktoru nejistoty a biologické proměnlivosti Aby byla možn á harmonizace ochranných lhůt v EU, je CVMP navrhov á no přednostn í použit í statistick é metody – zvl áš tě u nových substanc í Aby byla možn á harmonizace ochranných lhůt v EU, je CVMP navrhov á no přednostn í použit í statistick é metody – zvl áš tě u nových substanc í

Statistická metoda – úskalí Dostatečné množství relevantních dat – min 3 časové body Např. jsou-li hodnoty pod LOQ dosazuje se LOQ – min počet zvířat/1 čas bod – splnění parametrů homogenita dat normální rozložení linearita Např. data z místa injekční aplikace často vykazují velkou variabilitu, jak v rámci jednoho časového bodu odběru, tak v rámci celé studie (např. 30 den hodnoty nižší než 35 den atp.)

Alternativní metod y - úskalí U starých substancí se staršími studiemi event. u nových substancí nebo v případech, kde prokazatelně nelze hodnotit statisticky Lze použít: první časový bod, kdy byly všechny hodnoty ve všech poživatelných tkáních pod MRL (pokud tomu odpovídají vstupní data)- Preferováno je použití : Časový bod, kdy kdy byly všechny hodnoty ve všech poživatelných tkáních pod MRL + „safety span“ 10 – 30 % např. pro kompenzaci biologické variability – Problém nastává např. v případě, že v posledním časovém okamžiku studie nejsou všechny hodnoty pod MRL

Studie

Metodika PLÁN do konce listopadu prasnic vzorkovat 16 amoxicilinů (včetně amox v kombinaci) 10 jatek játra, ledviny, sval (místo vpichu a okolí) SKUTEČNOST do 17. prosince prasnic vzorkováno (74 amoxicilinové) 41 betalaktamů 10 jatek játra, ledviny, sval (místo vpichu a okolí)

Porážky - z celkového počtu 159 porážek, na kterých byly v roce 2009 poráženy prasnice -vybráno 10 porážek vhodných k provedení studie Hlavní kritéria výběru: -střední porážecí kapacita (průměr 840 ks prasnic ročně) -rovnoměrnost porážení prasnic v průběhu roku -různorodost dodavatelů (průměr cca 12 větších dodavatelů) Důležitý faktor: -schopnost personálního zajištění chodu studie

Přípravky Výběr přípravků - registrované VLP s amox -dle frekvence použití (interní údaje ÚSKVBL) -primární „checklist“ doprovázející prasnici - abecední řazení - prostor pro doplnění jiného VLP s amox (16 VLP na trhu) - prostor o záznamech dalších inj. VLP aplikovaných v posledních 2 měsících

„checklist“

Laboratorní analýza Screening pro analýzu reziduí amoxicilinu: Použita mikrobiologická 6 plotnová metoda – svalovina z okolí místa vpichu – játra – ledviny Konfirmace: Pozitivní screeningové nálezy konfirmovány metodou kapalinové chromatografie s hmotnostní detekcí (HPLC/MS/MS).

Analyzované vzorky 1. svalovina z místa vpichu* g 2. svalovina z okolí místa vpichu** 500 g 3. játra 500 g 4. ledviny 500 g Vzorek svalu z místa vpichu byl homogenizován celý Vzorky svalu mimo místo vpichu, jater a ledvin byly před homogenizací rozděleny na polovinu (½ screen + ½ konfirm) * Místo vpichu = předpokládané místo vpichu ** Okolí místa vpichu = předpokládané okolí místa vpichu Takto bylo odebíráno nikoliv za účelem kontroly metodiky, ale za účelem zvýšení pravděpodobnosti záchytu cca 900 g svaloviny

MRL vs. parametry analýzy MRL : sval, játra, ledviny:50 μg/kg Parametry metody: LOD, LOQ (μg/kg): svaljátra ledviny LOD 5,25,9 5,8 LOQ 15,6 17,7 17,4 Rozhodovací limit (CCα) a detekční schopnost (CCβ) dle Rozhodnutí Komise 2002/657/EC (μg/kg): svaljátra ledviny CCα 51,951,1 52,0 CCβ 53,9 52,2 53,3

Výsledky I 18 dnů Nejkratší skutečný čas od posledního podání 64 dnů Nejdelší skutečný čas od posledního podání 59 dnů Nejdelší skutečný čas od posledního podání, kdy byla detekována rezidua ve svalovině v místě inj. podání i jeho okolí

Výsledky II Reálný čas porážky po posledním podání inj. přípravku s amox – počty pozitivních: 18 – 29 dnů 5 prasnic pozitivních: IS a/nebo SIS (+ 1 játra) 30 – 42 dnů1 prasnice pozitivní: IS 43 – 59 dnů8 prasnic pozitivních: IS a/nebo SIS IS = injection site, SIS = surrounding of injection site

Výsledky III Zjištěná rozmezí hladin pozitivních vzorků: (MRL = 50 µg/mg) Předpokládané místo vpichu (IS): 56.3 µg/mg – 3412 µg/mg amox Předpokládané okolí místa vpichu (SIS): 166 µg/mg – 1237 µg/mg amox

Počet pozitivních prasnic => určeny ke konfiskaci, vyloučeny z lidské spotřeby pozn. pouze „amoxicilinové“

Pozitivní výsledky – vzorky svaloviny pozn. sval jako celek bez rozlišení místa odběru

VLP obsahující betalaktamy zachycené ve studii – procentuální rozložení četnosti

Výsledky

Je konzument skutečně ohrožen ? Využití masa z porážených zvířat Tepelná stabilita event. reziduí amox – Alergizující potenciál původního amox – Alergizující potenciál metabolitů Chronická vs. akutní expozice

Závěry Po zpracování výsledků studie byli informováni držitelé rozhodnutí o registraci přípravků, u kterých byly zjištěny nálezy reziduí V současnosti probíhá přehodnocení ochranných lhůt u skupiny přípravků obsahujících amoxicilin

Návrh řešení Stanovit ochrannou lhůtu pro prasata: OL: Prasata do XX kg: YY dnů Prasata nad XX kg: ZZ dnů U přípravků, kde nejsou dostupná data pro prasata vyšších váhových kategorií bude OL: Prasata do XX kg: YY dnů Nepoužívat u prasat nad XX kg v důsledku možné perzistence reziduí v místě injekčního podání.

Důvody pro výše uvedený přístup změny OL Ochrana zdraví konzumenta Zachování spektra ATM přípravků včetně starších substancí ( … zvážení perspektivy otázky rezistence při nadužívání přípravků s krátkou OL – např. cefalosporinů 3.generace) Nediskriminující podmínky pro různé přípravky a jejich držitele V praxi => veterinární lékař by neměl použít VLP off- label, pokud je na trhu adekvátní VLP (zde vztahujeme na přípravky s kratší OL u menších prasat vs. přípravky s delší OL, které jsou pro vyšší váhové kategorie)

Závěry pro praxi Nutno sledovat změny !  texty SPC, PI  v rámci změn registrace změny i v dávkování a OL V případě nutnosti použití přípravku off- label => včetně např. situací, kdy byl aplikován větší objem do jednoho místa podání než je uvedeno ve schváleném SPC => je nutno zvážit délku ochranné lhůty => odpovídající navýšení => legislativa uvádí nejméně 28 dnů => ale u injekčních přípravků (zejména suspenzí, přípravků na olejové bázi, LA přípravků) je nutné výrazné navýšení OL Nutno informovat chovatele => návaznost IPŘ Zlepšit hlášení NÚ v rámci farmakovigilance

DĚKUJEME …hlavně účastníkům projektu …