Stáhnout prezentaci
Prezentace se nahrává, počkejte prosím
1
Biochemické screeningové metody
Bruno Sopko
2
Obsah Úvod Infarkt myokardu Koagulace Jaterní testy Dyslipidémie
Endokrinologie
3
Úvod Markery Metody detekce Biochemické Imunochemické
4
Infarkt myokardu Úvod Troponin Kreatin kinasa LDH AST Myoglobin
Ischemicky modifikovaný albumin Glykogen fosforylasa BB
5
Infarkt myokardu - Úvod
Diagnosa je založena na detekci látek uvolněných do oběhu z poškozené tkáně. Průběh koncentrací je založen na: na lokalizaci v buňce na relativní molekulové hmotnosti na rychlosti vylučování na průtoku krve v postižené oblasti
6
Infarkt myokardu - Troponin
cTnT a cTnI se v krvi nevyskytují a mají specifické AK složení (nástup 3-6 hodin po vzniku bolesti) Imunochemické metody GLORIA (Gold Labelled Optically Read Immuno Assay – variace ELISA)
7
Infarkt myokardu – Kreatin kinasa
CK M(muscle) CK B (brain) podjednotky (CK- MB) Enzymová kinetika (protilátky proti podjednotce M) Imunochemie CK-MB mass
8
Infarkt myokardu - LDH Specifický LDH1 Stanovení LDH aktivity
Určení koncentrace LDH1 elektroforeticky
9
Infarkt myokardu – AST Z mitochondrií při nekrose, nespecifický
ASP -> oxalacetát Oxalacetát + NADH + H+-> malát + NAD+
10
Infarkt myokardu – Myoglobin
Rychlý nástup, nespecifický Imunochemicky
11
Infarkt myokardu – Ischemicky modifikovaný albumin
Test spočívá v určení vazebné kapacity albuminu pro kobaltnaté ionty. Albumin zdravých jedinců HSA (human serum albumin) váže více kobaltu než ischemický albumin IMA. Při vlastním stanovení se k vyšetřovanému séru přidají kobaltnaté ionty v molárním množství srovnatelném s počtem molů albuminu. Část iontů kobaltu se naváže na albumin, část zůstává volných v roztoku. Je-li ve zkoumaném séru HSA, naváže se relativně hodně kobaltu; je-li přítomen IMA, pak se naváže kobaltu méně. Takže v případě HSA zbývá v roztoku méně volných kobaltnatých iontů, při IMA je jejich koncentrace vyšší. Volné kobaltnaté ionty jsou stanoveny spektrofotometricky přidáním dithioerythrolu, který vytváří s ionty kobaltu barevný komplex.
12
Infarkt myokardu – Glykogen fosforylasa BB
Po 4 hodinách ELISA
13
Koagulace Úvod Protrombinový čas (PT)
Aktivovaný parciální tromboplastinový čas (aPTT) Trombinový čas (TT) Fibrinogen Claussova metoda Modifikovaná PT metoda Imunologické metody Gravimetrické metody
14
Koagulace - Úvod
15
Koagulace – PT (Quickův test)
Používá se k detekci problémů srážlivosti krve (vitamin K) a detekci účinků protisrážlivých léků (Warfarin) Plasma + citrát + koagulační faktor III Udává se poměr k referenčnímu vzorku
16
Koagulace - aPTT Detekce problémů při krvácení, předoperační testy, určení dávky heparinu Plasma + citrát + kefalin + kaolin
17
Koagulace - TT Vyšetřuje se jím závěrečná fáze koagulační kaskády, konverze fibrinogenu na fibrin po přidání exogenního trombinu. Trvá cca do 20 sekund. Prodloužen je při poruchách fibrinu, hypofibrinogenemii či afibrinogenemii či při přítomnosti FDP Plasma + citrát + trombin
18
Koagulace - Fibrinogen
Claussova metoda – přebytek trombinu Modifikovaná PT metoda - měří se serie různých ředění plazmy Imunologické metody - ELISA, měří se množství, ne aktivita Gravimetrické metody – měření hmotnosti sraženiny, časově náročné
19
Jaterní testy Laboratorní ukazatelé poškození jaterních buněk
ALT AST LDH Laboratorní ukazatelé městnání žluči v játrech ALP GGT Bilirubin Laboratorní ukazatelé proteosyntetické funkce jater Albumin Celková bílkovina Protrombinový čas
20
Jaterní testy – AST, ALT, LDH
ALT v játrech, AST i jiných tkáních AST/ALT – de Rittisův index ( > 2 značí alkoholické jaterní choroby) LDH4 a LDH5 specifické pro játra LDH5 – tumor jater
21
Jaterní testy – ALP, GGT, Bilirubin
Alkalická fosfatáza: p-Nitrofenyl fosfát → p-nitrofenol + PO4 3- Gama-glutamyltransferáza: γ–glutamyl-p-nitroanilin → p-nitroanilin Bilirubin: Bilirubin + diazotovaná kys. sulfanilová + NaNO2 → azobilirubin
22
Jaterní testy – Albumin, celková bílkovina, PT
Albumin: reakce s bromkresolovým purpurem nebo zelení Celková bílkovina: biuretová reakce PT: koagulace
23
Dyslipidémie Úvod Celkový cholesterol Triacylglyceroly HDL cholesterol
LDL cholesterol
24
Dyslipidémie - Úvod Lipoprotein Zdroj Průměr (nm) Hustota (g/ml)
Složení Hlavní lipidová složka Apolipoproteiny Protein(%) Lipid (%) Chylomikron střevo < 0,94 1 - 2 Triacylglycerol A-I, A-II, A-IV,1 B-48, C-I, C-II, C-III, E VLDL játra 30-90 0,93 – 1,006 7 - 10 B-100, C-I, C-II, C-III IDL katabolismus VLDL 25-35 1,006-1,019 11 89 Triacylglycerol, cholesterol B-100, E LDL katabolismus IDL 20-25 1,019 – 1,063 21 79 cholesterol B-100 HDL2 játra, střevo, katabolismus VLDL a CM 90-120 1,063 – 1,125 33 67 Cholesterol, fosfolipidy A-I, A-II HDL3 50-90 1,125-1,210 57 43 Cholesterol Lp(a) 1,050 – 1,100 74 26 B-100 a apo(a) Remnantní CM katabolismus CM >500 6 - 8 Cholesterol, Triacylglycerol B-48, E
25
Dyslipidémie – Úvod, klasifikce
Izolovaná hypercholesterolémie - zvýšení koncentrace celkového cholesterolu při normální koncentraci triglyceridů Smíšená hyperlipidémie - současné zvýšení koncentrace celkového cholesterolu i triglyceridů Izolovaná hypertriglyceridémie – zvýšení koncentrace triglyceridů při normální koncentraci celkového cholesterolu Dyslipidémie metabolického syndromu Sekundární dyslipidémie
26
Dyslipidémie – Celkový cholesterol
hydrolýza esterů cholesterolu na volný cholesterol a mastné kyseliny pomocí enzymu cholesterolesterasy oxidace neesterifikovaného cholesterolu na 4- cholesten-3-on za současného vzniku peroxidu vodíku v reakci katalyzované cholesteroloxidasou Vznik barevného produktu reakcí peroxidu vodíku v oxidační kopulaci 4-aminoantipyrinu a fenolu v přítomnosti dalšího enzymu peroxidasy
27
Dyslipidémie – Triacylglyceroly
Lipoproteinová lipasa katalyzuje hydrolýzu triacylglycerolů na glycerol a mastné kyseliny Uvolněný glycerol se převádí působením glycerolkinasy v přítomnosti ATP na glycerol-3- fosfát, který je pomocí glycerol-3- fosfátoxidasy oxidován na dihydroxyacetonfosfát. Peroxid vodíku je využíván v další reakci katalyzované peroxidasou k oxidační kopulací 4-aminoantipyrinu s derivátem fenolu
28
Dyslipidémie – HDL cholesterol
Blokování non-HDL částic pomocí protilátky proti ApoB (VLDL, LDL, CM) Postup jako v případě celkového cholesterolu
29
Dyslipidémie – LDL cholesterol
Nepřímé stanovení - Friedewaldův vzorec: LDL-cholesterol = celkový cholesterol – HDL- cholesterol – TG/2,2 Přímé stanovení Pomocí detergentů a dalších látek blokován non- LDL cholesterol Stanovení metodou jako celkový cholesterol
30
Endokrinologie Úvod Růstový hormon (STH) Prolaktin
Adrenokortikotropní hormon (ACTH) Thyrotropin (TSH) Folikuly stimulující hormon (FSH) Luteinizační hormon (LH) T4 tyroxin (tetrajodtyronin), T3 trijodtyronin Parathormon Kortizol Diabetes mellitus
31
Endokrinologie – Úvod: Laboratorní diagnostika
Stanovení koncentrace hormonů Sledování metabolismu Dynamické testy Stimulační Supresivní
32
Endokrinologie - Růstový hormon (STH)
Podporuje růst svalů a pojivových tkání Štěpí tuky Snižuje zpracování glukosy Zadržuje ionty Metoda IRMA (Imunoradiometrická analýza)
33
Endokrinologie - prolaktin
Složitá regulace sekrece Patologická zvýšení Metodou IRMA nebo ELISA
34
Endokrinologie - ACTH Adrenokortikotropní hormon řídí sekreci glukokortikoidů a androgenů z kůry nadledvin Elektroluminiscence (ECLIA) chemiluminiscence je iniciována elektricky tripropylamin (TPA) - přenašeč e- na Ru
35
Endokrinologie - TSH Tyreostimulační hormon ELISA
36
Endokrinologie – FSH, LH
folikulostimulační hormon a luteinizační hormon se doplňují při řízení funkce gonád – menstruační cyklus a ovulace u žen, spermatogeneze u mužů ELISA
37
Endokrinologie – T4, T3
38
Endokrinologie – T4, T3 způsobují zvýšení metabolické aktivity a tím vyšší spotřeba O2 a produkce tepelné energie stimulace syntézy RNA a proteosyntesy T4 je prohormon pro T3 T3 a T4 působí negativní zpětnou vazbou na TSH ELISA
39
Endokrinologie - Parathormon
základní hormon příštítných tělísek, diagnostika primární hyperparatyreózy, diferenciální diagnostika hypokalcémií reguluje množství vápníku a fosforu v krvi a odbourávání vápníku z kostí a uvolňování do krve IRMA
40
Endokrinologie - Kortizol
steroidní hormon, tvořený v kůře nadledvin regulace ACTH, CRH metabolismus cukrů na úkor metabolismu proteinů účinky: glukoneogeneze z AK a MK Proteolýza- proteokatabolismus - hlavně ve svalech Lipolýza snížení citlivosti receptorů pro inzulin potlačení proteoanabolismu- imunosupresivní , antialergické a antiflogistické účinky, snížené vstřebávání Ca2+ v GIT
41
Endokrinologie - Kortizol
ve slinách ELISA
42
Endokrinologie - Diabetes mellitus
Screening nepřímý – koncentrace Glc v krvi 2 typy absolutní nedostatek inzulinu → diabetes mellitus I. Typu Buňky méně odpovídají na inzulín - diabetes mellitus II. Typu
43
Literatura: R.K. Murray a spol.: Harperova biochemie;český překlad 23. vydání, H8H, 1998 Bohuslav Matouš et al.: Základy lékařské chemie a biochemie, 2010 Allan D. Marks, MD: Basic Medical Biochemistry a Clinical Approach, Lippincott Williams & Wilkins, 2009
Podobné prezentace
© 2024 SlidePlayer.cz Inc.
All rights reserved.