Jana K PODĚKOVÁNÍ I. MarekJirkaRadim Soňa Jana M Láďa Zuzana Ivo Radek Adriana Marcela Jana V Hanka Lenka Ondra Peter Irena Jana HKatka Ilona.

Prezentace na téma: "Jana K PODĚKOVÁNÍ I. MarekJirkaRadim Soňa Jana M Láďa Zuzana Ivo Radek Adriana Marcela Jana V Hanka Lenka Ondra Peter Irena Jana HKatka Ilona."— Transkript prezentace:

1 Jana K PODĚKOVÁNÍ I. MarekJirkaRadim Soňa Jana M Láďa Zuzana Ivo Radek Adriana Marcela Jana V Hanka Lenka Ondra Peter Irena Jana HKatka Ilona

2 Z meče pluh Aneb od toxinu manipulujícího imunitní odpovědí k nástroji pro imunology P. Šebo MBÚ AV ČR

3 OBECNĚ: Bakterie se v kontaktu s hostiteli vyvíjely stovky miliónů let a vyvinuly si úžasné nářadí k manipulaci hostitele

4 Snad není buněčný proces který by nezmanipulovaly… Bakteriální toxiny jsou “chytré, krásné a užitečné”

5 heptamer alfa-toxinu Stapylococcus aureus Bakteriální Bakteriální toxiny jsou krásné…

6 Manipulují například hladinou cAMP – buněčnou signalizací Ac ATPcAMP Cya Ac ATP cAMP ExoY ATPcAMP TTSS P. aeruginosa ExotoxinY B. anthracis EdTx Cholera toxin Pertussis toxin Gs  Gi  Ac ATPcAMP EF ATPcAMP ADPR TII TIV Sec TI B. pertussis AC (Steve Lory ETOX 11, 2003) Toxiny jsou mazané …

7 Intraepithelial DC DNT Periplasm Capsule PT CyaA TCT FHA fimbriae Pertactin Macrophage IL-6 ? Immature dendritic cell T cell Neutrophil Macrophage B cell Submucosa Intoxication ATPcAMP CD11b/CD18 Cations B.pertussis secreting CyaA Channel formation ↓ IL-12, TNFα, CCL3 ↑ IL-10, IL-6, (Semi-mature state of DC ?) ↓ T regulatory response ? Apoptosis Cell lysis Phagocytic functions Phagocytosis Superoxid production Chemotaxis ? Dendritic cell Neutrophil Macrophage Type I CyaA  IL-6 invasion ┴ Aktivita ACT na sliznici průdušnice Vojtová et al., 2006, Curr. Op.. Microbiol. 9, 69-75 Osičková et al., (1999) J. Biol. Chem. 274, 37644)

8 AC doménaRTX hemolyzín 1 400 500 7001000 1706 Hydrofóbní segmenty I IIIII CBS Palmitoylace na K860 aK983 Sekreční signáll NC 42 kalcium vazebných míst X-(L/I/F)-X-G-G-X-G-(D/N)-D T25 T18 CD11b/CD18 Vazebné místo I II III Nedávno byla určena struktura AC domény C-CaM T18 T25 Guo Q. et al. (20005) EMBO J. 24, 3190–3201

9 Skenovací elektronová mikroskopie: ACT 10 ng/ml 0 min 5 min 30 min Při > 50 ng ACT/ml vede ruffling a změny aktinového cytoskeletu k inhibici fagocytosy

10 III. Detoxifikovaný ACT jako užitečný nástroj pro imunology

11 Proteasome Endosome MHC II CD4 + T cell Transporter associated with antigen procesing MHC I MHC II Golgi Endoplasmatic reticulum MHC I peptide AC Repeats CD8+ T cell Repeats ? ?  M  2 integrin CD11b/ CD18 Ag Vložený antigen (z viru, bakterie, parazita, nádoru) dACT jako dopravce antigenů translokace endocytóza

12 Příklady využití I. diagnostika latentní infekce Mycobacterium tuberculosis (LTBI) lidí a skotu Robert J. WilkinsonImperial College, London Martin VordemeierVLA Surrey

13 Příklady využití II. Očkování proti Plasmodium berghei (myší model malárie) Susanne Tartz Thomas Jacobs Bernhard Nocht Insitute for Tropical Medicine, Hamburg

14 Příklady Příklady využití III. Imunoterapie nádorů vyvolaných HPV16 Ve spolupráci s Dr. Šárkou Němečkovou, ÚHKT Praha

15 Prime/Boost imunoterapie nádorů vyvolaných E7 onkoproteinem HPV16 Mackova et al. (2005) Cancer Immun. Immunother., 55, 39-46

16 Stav ‘technologie’ po 13-ti letech práce ‘Proof of concept in mice’ –specifické CTL CD8 + and CD4 + T buněčné odpovědi Ochranná imunita proti virům (LCMV)Ochranná imunita proti virům (LCMV) –Ochranná imunita proti Plasmodium berghei (myší malárie) –Imunoterapie experimentálních nádorů vyvolaných HPV16 –polyvalentní buněčná imunitní odpověď - několik antigenů v různých místech (US Patent No. 5,503,829, No. 5,679,784, No. 5,935,580 EU Patent application No. 03291486.3, US Prov 03495, 6094 (2003) ) Mnoho preklinických dat z in vitro a in vivo modelůMnoho preklinických dat z in vitro a in vivo modelů Připravená toxikologická studiePřipravená toxikologická studie Připravovány phase I&II klinické testy na pacientech s:Připravovány phase I&II klinické testy na pacientech s: –melanomy – the 6th EU FP consortium THERAVAC (Ludwig Institute) –S nádory děložního čípku (HPV16) - BT Pharma S.A. Toulouse France Vylepšení detekce latetní infekce Mycobacterium tuberculosis u lidí a skotuVylepšení detekce latetní infekce Mycobacterium tuberculosis u lidí a skotu Další diagnostické možnosti u jiných infekcí a rakovinyDalší diagnostické možnosti u jiných infekcí a rakoviny reviewed in: Šimšova et al. (2004). Int. J. Med. Microbiol., 293, 571-576.