Kapilární elektroforéza v nevodném prostředí - NACE

Prezentace na téma: "Kapilární elektroforéza v nevodném prostředí - NACE"— Transkript prezentace:

1 Kapilární elektroforéza v nevodném prostředí - NACE
Možnost využít rozpouštědla, které ovlivní selektivitu separace Nízká vodivost pracovních elektrolytů rozpuštěných v nevodných rozpousštědlech Možnost separace obtížně separovatelných látek možnost analýzy látek nestabilních ve vodném prostředí Fyzikálně chemické vlastnosti rozpouštědel používaných v NACE

2 Požadavky na rozpouštědlo pro NACE
Kompatibilní s materiálem kapiláry a detektorem musí být dobrým rozpouštědlem pro složky pracovního elektrolytu i pro separované analyty musí být dostupné v dostatečné čistotě. Důležitý je poměr relativní permitivity a viskozity! Čím je viskozita větší tím bude pomalejší separace. Vzhledem k nízké viskozitě a poměrně dostatečné polaritě jsou nejčastěji používaná rozpouštědla pro NACE methanol a acetonitril, případně jejich směsi v různých poměrech. Methanol je navíc rozpouštědlo, které změní disociační konstanty kyselin a zásad oproti vodnému prostředí.

3

4 Electrophoregrams of nine structurally similar chiral anticholinergic drugs using 20 mM phosphoric acid and 10 mM NaOH, containing 10 mM HDMS-β-CD in methanol. (1) Compound I; (2) compound II; (3) compound III; (4) compound IV; (5) compound V; (6) compound VI; (7) compound VII; (8) compound VIII; (9) compound IX. (*) 55 cm capillary tube in efficient length for compounds IV and V; 45 cm for others.

5 Analysis of phtalate derivatized PEG 2000 (2 mM). Uncoated fused
silica capillary: 67 cm lt, 58.5 cm ld, 50m i.d. Running buffer: 210mM Tris at pH 8.7, with 0, 20, and 40% ACN. Capillary temperature: 25 ◦C. Run voltage: 30 kV. Injection at 50 mbar for 8 s. UV detection at 205 nm

6 Hydro–organic MEKC analysis of a cosmetic product containing
PEG with chain lengths between 8 and 21. Uncoated fused silica capillary: 58 cm lt, 44cm ld, 50m i.d. Running buffer: 20mM borax, 50mM SDS, 20% THF. Run voltage: 25 kV. Injection at 50 mbar for 6 s. UV detection at 234 nm. Peak E5: internal standard.

7 Využití heterokonjugace pro separace fenolických derivátů NACE
Heterokonjugace = konjugace mezi nedisociovanou kyselinou a vhodným aniontem Vhodný anion např. k. pikrová V nevodném aprotním rozpouštědle (acetonitril) se budou tvořit homokonjugáty: V případě, že se v systému vyskytuje další kyselina slabší než k. pikrová dojde ke tvorbě heterokonjugátů: Heterokonjugáty jsou v prostředí acetonitrilu stabilní a lze je vzájemně separovat

8

9 Aplikace plošné kapilární elektroforézy
Elektroforéza v plošném uspořádání se hodí pouze pro separaci molekul s vysokou hodnotou MR. Běžné jsou separace fragmentů peptidů, proteinů, enzymů a nukleových kyselin. Po ukončení separace je potřeba provést detekci odseparovaných látek vhodnou detekční metodou (barvením, imunofixací, MS apod.) Častěji je využívána jako metoda identifikační a semikvantitativní. Přesnou kvantitativní analýzu lze provést, ale velmi obtížně. Nejčastější je dnes 2D-gelová elektroforéza

10

11

12 SDS PAGE

13

14

15

16

17

18

19

20

21

22

23

24