MOŽNOSTI DETEKCE LIKVOREY Z.Čermáková,H.Novotná,J.Gottwaldová OKBH FN BRNO Pracovní den Brno

LIKVOREA Závažný stav s komunikací likvorových cest a nosní nebo středoušní dutiny Závažný stav s komunikací likvorových cest a nosní nebo středoušní dutiny Komplikace – bakteriální meningitida, Komplikace – bakteriální meningitida, mozkový absces mozkový absces Vysoká mortalita Vysoká mortalita

PRŮKAZ LIKVOREY Specifické parametry: Specifické parametry: Beta Trace protein Beta Trace protein Beta2 transferin Beta2 transferin Obsolentní je detekce pomocí nespecifických parametrů: Obsolentní je detekce pomocí nespecifických parametrů: glukóza, celková bílkovina,chloridy

BETA TRACE PROTEIN Prostaglandin D syntáza Prostaglandin D syntáza Syntetizován v buňkách chorioideálního plexu Syntetizován v buňkách chorioideálního plexu V likvoru jsou koncentrace 20-30x vyšší než v séru V likvoru jsou koncentrace 20-30x vyšší než v séru Stanovení: Stanovení: kvantitativní, imunonefelometrické kvantitativní, imunonefelometrické firma Siemens (Dade Behring)

BETA TRACE PROTEIN Referenční meze (firemní) Referenční meze (firemní) Sérum 0,33-0,59 mg/l Sérum 0,33-0,59 mg/l CSF 10,0-19,2 mg/l CSF 10,0-19,2 mg/l Likvorea 0,8 mg/l Likvorea 0,8 mg/l Z literatury 6,0 mg Z literatury 6,0 mg

BETA 2 TRANSFERIN Asialoforma transferinu Asialoforma transferinu Vzniká ze sérového transferinu aktivitou mozkové neuraminidázy Vzniká ze sérového transferinu aktivitou mozkové neuraminidázy V elektroforéze pohyblivost beta2 globulinů V elektroforéze pohyblivost beta2 globulinů Metody stanovení Metody stanovení Izoelektrická fokuzace, elektroforéza Izoelektrická fokuzace, elektroforéza s imunofixací pomocí protilátky značené s imunofixací pomocí protilátky značené peroxidázou (SEBIA) peroxidázou (SEBIA)

BETA 2 TRANSFERIN Metoda ELFO na agaróze s následnou imunofixací Metoda ELFO na agaróze s následnou imunofixací Zvýšení citlivosti metody zakoncentrováním materiálu podle obsahu celkové bílkoviny Zvýšení citlivosti metody zakoncentrováním materiálu podle obsahu celkové bílkoviny centrifugační zkumavky s polopropustnou membránou Vivaspin centrifugační zkumavky s polopropustnou membránou Vivaspin Materiál s příměsí hlenu zpracován ve zkumavkách Salivetae firmy Sarstedt Materiál s příměsí hlenu zpracován ve zkumavkách Salivetae firmy Sarstedt

Zkumavka Vivaspin

Zkumavka Salivettae

PozitivníNegativní

vzorek CSF bílk.(g/l) CSF BTP (mg/l) 3695/18/100,5414, /20/100,2514, /20/103,605, /20/101,2014, /22/100,7923, /17/100,1714, /30/113,884, /29/100,1614, /27/100,2613, /27/100,2913, /31/100,7310, /31/100,2510, /1/112,247,00 průměrná hodnota (mg/l) 12,34

vzorekS-BTP(mg/l) žena-19380,63 muž-19710,67 muž-19640,75 žena-19580,60 žena-19740,76 žena-19760,47 žena-19411,31 muž-19840,92 žena-19110,85 průměr (mg/l) 0,77

vzorekB-2-transferin předpříprava vzorku pro b-2- transferin BTP (mg/l) směsný likvor pozitivní zahuštěno 40x 25,80 směsné sérum negativní 0,94 10%-1gpozitivní zahuštěno 40x 1,64 20%-1gpozitivní3,54 40%-1gpozitivní7,90 60%-1gpozitivní14,66 10%-4gpozitivní zahuštěno 20x 1,83 20%-4gpozitivní7,00 40%-4gpozitivní9,46 60%-4gpozitivní12,42 10%-32gnegativní nezahuštěno 1,57 20%-32gnegativní3,52 40%-32gnegativní6,58 60%-32gnegativní10,78

vzorekB-2-transferin BTP (mg/l) 1. sl. pozitivní 16,06 2.pozitivní3,68 3.negativní2,20 4.negativní1,33 5.negativní1,74 6.negativní1,25 7.negativní1,87 8.pozitivní10,94 9.pozitivní26,40 10.pozitivní2,78

Závěr Je možno použít obě metody Je možno použít obě metody Beta trace protein Beta trace protein rychlost stanovení rychlost stanovení pozitivita i ve vzorcích s vysokou CB pozitivita i ve vzorcích s vysokou CB Beta 2 transferin Beta 2 transferin cena cena jasná pozitivita při nízké příměsi CSF jasná pozitivita při nízké příměsi CSF

Děkujeme