Laboratórna diagnostika očkovaním preventabilných ochorení

Prezentace na téma: "Laboratórna diagnostika očkovaním preventabilných ochorení"— Transkript prezentace:

1 Laboratórna diagnostika očkovaním preventabilných ochorení
Nováková, E.: NRC HI, RÚVZ v Žiline Ústav mikrobiológie a imunológie JLF UK v Martine Laboratórna diagnostika očkovaním preventabilných ochorení Vakcinačný deň SR Žilina

2 Priamy dôkaz vyvolávateľa
- baktérie v odobratej vzorke z miesta momentálneho výskytu - mikroskopicky (tetanus) - kultivačne (diftéria, pertussis) - dôkaz antigénu (v CSM ) - dôkaz NK (PCR – M. tbc,)

3 Priamy dôkaz vyvolávateľa - 2
vírusy zo vzorky odobratej z miesta výskytu elektronová mikroskopia imunofluorescenčná mikroskopia dôkaz antigénu (rotavírus), HIT VNT dôkaz NK (HPV zo steru krčka maternice) - Izolácia vírusu pomnoženie (tkanivové kultúry, kuracie embryo, bunkové kultúry) identifikácia (CPE, mikroskopia, IFA, dôkaz antigénu HIT, VNT)

4 Nepriamy dôkaz vyvolávateľa
Dôkaz protilátok v sére pacienta sérologickými reakciami: Antigén + protilátka celkové protilátky – 2 vzorky s intervalom 14 dní s dôkazom signifikantného vzostupu geometrického titra protilátok protilátky typu IgM, IgG, IgA a ich dynamiky

5

6 BCG – Mycobacterium tbc
BCG - Bacillus Calmette Guérin - očkovanie kmeňom Mycobacterium bovis - skrížená imunita s Mycobacterium tbc. priama diagnostika ochorenia (v centrách mikroskopicky (predbežná) -- kultivačne 6-9 tyždňov -- PCR skrátenie diagnostiky

7 BCG – Mycobacterium tbc
Stanovenie špecifickej imunity určenie úrovne individuálnej imunity (po očkovaní) odhalenie latentnej infekcie (pred imunosupresívnou terapiou) in vivo Mantoux in vitro IGRA (Quantiferon)

8 IGRA – interferon gama release assay Quantiferon TB– in vitro test na stanovenie špecifickej bunkami sprostredkovanej imunity metóda určená na detekciu ochorenia a monitorovanie in vitro stanovenie aktivity CMI v plnej krvi

9

10 Bežný postup pri vyhľadávaní latentnej tbc infekcie
Mantoux – in vivo test na stanovenie bunkovej špecifickej odpovede po expozícii antigénu PPD (spoločný pre M.tbc aj BCG) - záťaž antigénom v teréne imunodeficitných pacientov - možná anergia - pamäťové bunky po BCG vakcinácii, - nízka špecificita, nízka senzitivita, - boostrovanie PPD antigénom

11 Iná možnosť – dôkaz bunkovej imunity in vitro
Quantiferon / IGRA in vitro testovanie špecifickej imunity po expozícii plnej krvi pacienta antigénom špecifickým pre M. tbc budú stimulovať len špecifické pamäťové bunky po kontakte s M.tbc antigénmi bez skríženej reakcie s antigénmi BCG vakcíny antigén nie je podaný pacientom – vylúčenie rizika expozície u imunosuprimovaných antigén neboostruje pamäťové bunky pacienta

12 Interpretácia: latentna nešpecif
Skúmavka s krvou pacienta a M.tbc antigénom Negat kontrolka – vylúči nešpecifickú sekréciu (napr. po liečbe) Pozit.kontrolka – ukáže schopnosť reagovať (negat. u imunokompromitovaných alebo po terapii) pozit pozit negat negat negat pozit negat negat pozit pozit pozit negat negat negat falošne

13 Porovnanie Mantoux: in vivo
reagujú pamäťové bb po BCG aj po M.tbc. stimulácii aplikácia PPD i.d. zápal s induráciou v mieste vpichu Quantiferon: in vitro pamäťové bb po M.tbc infekcii stimulované in vitro sekrécia cytokínov dôkaz: ELISA

14 Corynebacterium diphtheriae záškrt – diftéria NRC – ÚVZ Košice
Corynebacterium diphteriae - gram pozitívna palička. Kultivačné vyšetrenie – je dobré upozorniť laboratórium Toxigénny kmeň - toxigenicitu kmeň získa prostredníctvom bakteriofága, nie všetky kmene sú toxigénne Testovanie toxigenity kmeňa - Elekov test imunodifúzie in vitro

15 Diftéria - imunita protektívna antitoxická imunita – stanovenie hladiny antitoxických protilátok IgG (metóda ELISA) – je dôležité udržovať antitoxickú imunitu na dostatočnej úrovni -- Schickov kožný test - dôkaz neutralizujúcich protilátok - i.d. podaním difterického toxínu

16 Tetanus G + sporulujúca anaeróbna palička
Mimo tela prežíva roky ako odolná spóra V tele za anaeróbnych podmienok germinuje na vitálnu baktériu produkujúcu toxín diagnostika – obvykle stačí klinická mikrobiologicky – typický obraz v mikroskopickom preparáte po germinácii spóry kultivačne – anaeróbna kultivácia – klinicky bezvýznamná dôkaz toxínu – laboratórne na laboratórnych myšiach alebo imunoanalýzou (klinicky bezvýznamná)

17 Antitoxická imunita – dôkazom antitoxických protilátok Dôležité je udržiavať dostatočnú hladinu antitoxickej imunity Po prežitom ochorení neexistuje špecifická imunita – nie je dostatočný antigénny stimul - preočkovať

18 Pertussis - čierny kašeľ
Bordetella pertussis - gram negatívna palička Diagnostika – priama – zriedkavo požadovaná - veľmi náročná (odber, diagnostické pôdy, dlhodobá kultivácia) -- nepriama – aglutinačné protilátky z 2 odberov z odstupom 14 dní alebo špecifické IgG, IgM , IgA

19 Čierny kašeľ stanovenie imunity ELISA IgG NRC ÚVZ Banská Bystrica
Konfirmačné vyšetrenie PCR B

20 Hemofilové invázne ochorenia
Haemophilus influenzae typ b – Očkovanie nezabráni infekciám horných dýchacích ciest, prítomnosti H.influenzae na sliznici ochoreniam opúzdranými kmeňmi typu a, c, d, f Diagnostika – priama – kultivačne z HK (invázne ochorenia) a CSM, punktát tkaniva -- mikroskopicky z CSM, -- dôkaz antigénu z !!!nikdy neodoberať vzorku pri epiglotitíde!!!

21 NRC RÚVZ Žilina Dôkaz protilátok nemá diagnostický význam
stanovenie antiinfekčnej imunity – dôkaz špecifických protilátok metódou ELISA

22 Pneumokokové invázne ochorenia
Priama diagnostika – kultivačne krv na hemokultiváciu, CSM, aspirát z pľúc Streptococcus pneumoniae Dôkaz existencie púzdra – podľa rastových charakteristík, Burriho metóda negatívneho farbenia Určenie sérotypu – polysacharidové púzdro (96 typov) – nepriama aglutinácia špecifickými sérami – dostupná – klinicky nevýznamná (epidemiologicky významná)

23 Dôkaz protilátok proti Str.pneumoniae
Stanovenie špecifických protilátok – (proti 23 antigénom) – ELISA – postvakcinačné, postinfekčné protilátky postvakcinačné – typovo špecifické chránia predovšetkým pred inváznymi ochoreniami (meningitída, pneumónia) Str.pneumoniae daného sérotypu významný je vplyv kolektívnej imunity na zníženie používania antibiotík

24 MMR – osýpky, mumps, ružienka
diagnostika v minulosti klinická laboratórna -- sérologický dôkaz IgM protilátok – – virologická diagnostika vírusu Interpretácia výsledkov – špecificita použitých testov, nešpecifická stimulácia protilátky produkujúcich buniek (u tehotných a v priebehu iných infekcií -- laboratórny výsledok je pomocným U očkovaných a pri kolektívnej imunite je významný klinický obraz a epidemiologická anamnéza

25 NRC ÚVZ Bratislava

26 Skríning intrauterinnej infekcie vírusom rubeolly
teratogénny účinok vírusu pri primoinfekcii tehotnej - Greggov sy vyšetrenie IgM protilátok pozitivita = akútne ochorenie = včasné Ab po očkovaní možnosť nešpecifickej polyklonálnej aktivácie a pozitivity testu u tehotných prítomnosť protektívnych IgG v populácii po očkovaní

27 Poliomyelitída NRC ÚVZ Bratislava
Klinická diagnostika + konfirmácia izoláciou vírusu Diagnostika – priama zo stolice (nie výter) – -- nepriama – dôkaz postvakcinačných alebo postinfekčných protilátok (KFT, VN T)

28

29 Hepatitída A – stanovenie protilátok anti HAV total (IgM+IgG) -- anti HAV IgM
IgM = akútné ochorenie alebo po 1. dávke OL

30 Hepatitída B – antiHBs – po očkovaní aj po ochorení po ochorení aj anti HBc total ochorenie HBsAg, HBcIgM, HBeAg – aktívna infekcia

31 Ďalšie typy očkovania Kliešťová encefalitída – diagnostika nepriama ELISA IgM IgG – prekonané ochorenie alebo po očkovaní Rotavírusová enteritída diagnostika ochorenia priama Latex aglutinácia zo stolice -- antiinfekčná a postvakcinačná sa nestanovuje

32 Očkovanie proti chrípke NRC ÚVZ Bratislav
V. chrípky - typ A alebo B v období epidémie je diagnstika klinická dôkaz priamy pre epidemiologické účely a identifikáciu vírusu – virologická diagnostika – odber – výplach z nazofaryngu do transportného média dôkaz nepriamy – IgG, IgM a IgA protilátky – špecifické pre daný typ chríkového vírusu

33 HPV infekcia krčku maternice HPV – prekanceróza
-- diagnostika priama -- ster z krčka maternice -- histologické vyšetrenie PAP smear dôkaz prítomnosti LR alebo HR HPV – genetickou sondou (alebo PCR) Existencia viacerých typov – najviac 16 a 18 (podľa zahraničných štúdií) Význam vyšetrenia – identifikácia infekcie bez klinických prejavov = dôležitosť preventívnych vyšetrení

34 Stanovenie individuálnej imunity
Prítomnosť špecifických protilátok po vymiznutí – existencia pamäťových buniek stačí booster dávka stanovenie existencie anamnestickej odpovede – ELISPOT pri antitoxickej imunite (dostatočná hladina)

35 ELISPOT metóda používaná na detekciu sekrécie cytokínov (napr. pri vývoji vakcín) stanovuje aktivitu špecifických buniek po expozícii antigénu in vitro

36 + špecifický antigén = = produkcia cytokínov ich stanovenie

37

38 Ďakujem za pozornosť