Mgr. Zdenka Fohlerova, Ph.D. Seminar: T-Cell V rámci udržitelnosti projektu OPVK NANOTEAM Datum konání: 20.10.2017

Poděkování projektu OP VK NANOTEAM CZ.1.07/2.3/.00/09.0224 NANOTEAM Budování výzkumných týmů a rozvoj univerzitního vzdělávání výzkumných odborníků pro mikro- a nanotechnologie Poděkování projektu OP VK NANOTEAM (udržitelnost projektu)

T-Cell ~20 um ~8 um Příprava kanálku PDMS/sklo Pokus o vpravení buňky do kanálku a transport na detekčni plochu kalorimetru Měření životaschopnosti buňky cca 24 hod pomocí holografického mikroskopu ~20 um ~8 um 4T1 buňky před a po trypsinizaci

-nezbytný konstantnÍ přísun živin, udržení pH T-Cell Zajištění optimálních podmínek pro buňku -nezbytný konstantnÍ přísun živin, udržení pH zajištění pouze 37°C kultivace buňky bez CO2 (místo hydrogenuhličitanového pufrovacího systému buňky využijí „umělý“ systém - HEPES nebo Leibovitz´s L-15 media) -flow rate: ∆P (100) = 117 pl/min … (800)= 936 pl/min Měření buněčného cyklu – sterická zabrana – G0 arest bunky?? -teplota jadra vs cytoplazma -teplota mitochondrií Buňky s různým procentuálním zastoupením mitochondrií

uDSF Water in oil droplet based microfluidic - kontinuální fáze – fluorované oleje (stabilita, biokompatibilita, malý výběr surfaktantů) - otázka použití surfaktantů ??? - water-oil rozhraní musí být ideálně inertní (minimální adsorpce, denaturace….) - SYBR (hydrofilni), SYPRO (hydrofobni) - DNA x Sybr Green λmax = 497 nm, λmax = 520 nm - proteins x Sypro orange λmax = 470 nm, λmax = 570 nm Roach et al., Anal. Chem., 77, 785 (2005). Copyright (2005) American Chemical Society http://hrm-dyes.gene-quantification.info

uDSF - aplikace Optimalizace systemu DNA: SybrGreen a protein (albumin):sypro orange – melting point analyzy (pomer koncentraci, intenzita signalu, stabilita kapky a optimalizace toku, pufru…) DNA s ruznou teplotou taní - kalibrace - publikace 2. Komplex Bcl-xL (cca 14 tis./100ug, Sigma) a BH3 peptidu (cca 120$/1mg, Anaspec) B-cell lymphoma-extra large (Bcl-xL), encoded by the BCL2-like 1 gene, is a transmembrane molecule in the mitochondria. It is a member of the Bcl-2 family of proteins, and acts as an anti-apoptotic protein by preventing the release of mitochondrial contents such as cytochrome c, which leads to caspase activation and ultimately, programmed cell death. The BH3-only members play a key role in promoting apoptosis. Vliv inhibitorů (potencionální chemoteraupetické léčiva) - gossypol, ABT -737, TW-37 …..(komerčně dostupné) 3. napr. p53 - E3ligase MDM2 interaction + potent drugs (napr. Nutlin-3A)(Tumor suppressor p53 is a potent transcription factor that effectively blocks cell cycle progression or induces apoptosis in response to diverse forms of stress thus protecting normal cells from malignant transformation)