Provedení DNA – otisků prstů DNA-Fingerprint

Zkumavky do každé pracovní skupiny DNA-Fingerprint

Podezřelí 1 - 5 Zkumavky obsahují 10µl vzorku DNA 70 µl Enzymová směs 10 µl CS DNA 0,24 g Agarózy 80 µl nanášecí pufr 10 µl DNA -marker DNA-Fingerprint

1. Příprava štěpení (restrikce) DNA DNA-Fingerprint

Pozor! U každého pipetování použij novou pipetu, aby se zabránilo kontaminaci. Pro důkladné promíchání prosím protřepávejte poklepáváním všechny zkumavky nejméně po dobu 30 sekund. DNA-Fingerprint

1. Zkumavky s DNA vzorky DNA 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl CS S 1 S 2 S 3 S 4 S 5 DNA 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl DNA-Fingerprint

1.1 Napipetujte 10 µl enzymové směsi do každé zkumavky CS S 1 S 2 S 3 S 4 S 5 DNA 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl Enzyme- 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl mix (ENZ) DNA-Fingerprint

2. Restrikce DNA pomocí enzymů Zkumavky v plováku nechejte ve vodní lázni inkubovat po dobu 20 minut při teplotě 37 ° C DNA-Fingerprint

3. Příprava gelové elektroforézy DNA-Fingerprint

3.1 Příprava elektroforézní komory Hřeben Kovové plíšky Sáňky Vložte gelovou vaničku s kovovými plíšky a hřebenem do elektroforézní komory. DNA-Fingerprint

3.2 Produkce agarózového gelu (0,8%) Dejte 0,24 g agarózy + 30 ml TAE (Tris-acetád-EDTA) -pufru do 250 ml Erlenmayerovy baňky. Vařte Erlenmeyerovu baňku krátce v mikrovlnné troubě, promíchejte, a vařte krátce znovu. DNA-Fingerprint

3.3 Nalévání gelu Nalijte gel v 55 °C do gelové vaničky. Upozornění: Otestujte teplotu na hřbetu ruky. Nehýbejte s gelem dokud zcela neztuhne! DNA-Fingerprint

3.4 Elektroforézní komora Jakmile gel ztuhne, odstraňte kovové plíšky z gelové vaničky. Naplňte komoru 270 ml TAE-pufru tak, aby jím byl gel celý pokryt. Vytáhněte hřebínek. DNA-Fingerprint

4. Příprava DNA-markeru Pipetujte 10 µl nanášecího pufru (LB) do 10 µl DNA markeru - označte (M). DNA-Fingerprint

5. Přidání10 µl nanášeného pufru Napipetujte 10 µl nanášecího pufru do CS and S1 – S5. 10 µl 10 µl 10 µl DNA-Fingerprint

6. Plnění jamek Pamatuj na pořadí! Levou jamku nechej volnou Napipetujte 20 µl z každého vzorku a 20 µl z DNA markeru (M) do jamek Pamatuj na pořadí! Pořadí: naplňuj zleva doprava DNA-Fingerprint

6. Plnění jamek Pozor! Nesmíte porušit gelovou jamku! DNA-Fingerprint

7. Gelová elektroforóza (při napětí 120 V cca 30 min) Zastavte elektroforézu, až se modrý pruh posune 1 cm před konec gelu. DNA-Fingerprint

8. Zviditelnění DNA Přeneste gel opatrně do barvicí nádoby a přelijte ho 60 ml barvícího roztoku, nechte působit cca 2 min. Slijte barvicí roztok zpět do Erlenmayerovy baňky. DNA-Fingerprint

9. Analýza gelu Který z podezřelých je pachatelem? CS S1 S2 S3 S4 S5 M DNA-Fingerprint

9. Výsledek DNA-Fingerprint