Zlepšování podmínek pro výuku technických oborů a řemesel Švehlovy střední školy polytechnické Prostějov registrační číslo : CZ.1.07/1.1.26/

Přímá metoda stanovení počtu buněk Autor: Ludmila Trunečková

Přímá metoda stanovení počtu buněk Přesné stanovení poctu buněk ve vzorku je v biologických a medicínských oborech pro radu postupu nezbytné. Své nezastupitelné místo nachází například v hematologii při stanovování počtu červených, bílých krvinek a krevních destiček. Stanovuje se počet buněk v jednotce objemu. Buňky se počítají pomocí speciálních počítacích komůrek: 1) Bürkerova 2) Thomova

Bürkerova komůrka Je to masivní podložní sklíčko, které je rozdělené dvěma rýhami na tři části. Ve střední části, která je o 1/10 mm nižší, než obě postranní části, jsou vyryté dvě mřížky. Přikrývá se pomocí krycího sklíčka, které se upevňuje pomocí dvou pružin. Mřížka je rozdělena na 9 velkých čtverců, 25 menších čtverečků, které jsou, jsou dále děleny na 16 čtverečků. Po obou stranách jsou kanálky, kam odtéká přebytečná kapalina.

Bürkerova komůrka

Pravidlo při počítání buněk Do celkového poctu částic se započítávají pouze ty, které leží nebo se dotýkají 2 zvolených stran, v tomto případe horní a levá (označeny černě). Částice dotýkající se pravé a spodní strany nezapočítáváme (označeny šedě).

Velikost útvaru v počítací síti Bürkerovy komůrky

Postup 1) Připravíme si suspenzi buněk vhodnou pro počítání v Bürkerově komůrce. 2) Suspenze, ve které máme stanovovat počet buněk, důkladně zhomogenizujeme pomocí vortexu, aby se netvořili shluky buněk. 3) Pipetou přeneseme kapku suspenze do prostoru na podložním sklíčku tak, aby se zaplnil celý prostor s počítací mřížkou. 4) Počítáme buňky v jednotlivých políčkách (čtvercích) stále stejným postupem - vždy zahrnujeme do obsahu jednoho políčka buňky ležící na 2 sbíhajících se stranách (např. na levé a dolní straně). 5) Z počtu buněk v 10 čtvercích vypočítáme aritmetický průměr a výsledek přepočítáme na skutečnou koncentraci buněk v původní suspenzi.

Hodnocení

Použití Přesné stanovení poctu buněk ve vzorku je v biologických a medicínských oborech pro řadu postupů nezbytné. Své nezastupitelné místo nachází například v hematologii při stanovování zastoupení jednotlivých krevních elementu ve vzorku krve. V potravinářství při počítání kvasinek v pekárenství. Při sledování mikrobiologické čistoty vody, vzduchu. Při sledování mikrobiologické čistoty provozního zařízení, čistoty obalů.

Zdroje Veselá, M., Drdák, M.: Praktikum z obecné mikrobiologie, 1999, VUT Brno

Děkuji za pozornost !