Zlepšování podmínek pro výuku technických oborů a řemesel Švehlovy střední školy polytechnické Prostějov registrační číslo : CZ.1.07/1.1.26/

Živné půdy Ing. Renata Grulichová

Definice živné půdy Živná půda (růstové médium nebo kultivační médium) = je substrát poskytující výživu a další vhodné podmínky organismům a jejich částem pěstovaným in vitro. Nejrozšířenějšího využití má v bakteriologii, mykologii a rostlinných biotechnologií.

Příprava živných půd Kultivace mikroorganismů se obvykle provádí ve sterilních živných médiích (půdách), které musí vyhovovat : všem nárokům příslušného mikroorganismu na výživu pH osmotický tlak.

Složení živných půd Základní složkou všech živných médií je voda. Dále obsahují živiny ve vhodných koncentracích, které slouží jako zdroj: energie uhlíku, dusíku fosforu biogenních prvků (P, S, Mg, Cl, Ca, Fe, K, Na) stopových prvků (Co, Zn, Mo, Cu). V některých případech mohou živné půdy obsahovat i růstové faktory (vitaminy, aminokyseliny) nebo jiné specifické sloučeniny podle nároků kultivovaných mikroorganismů nebo dle účelu kultivace.

Rozdělení živných půd podle konzistence Tekuté půdy = pomnožovací Používají se jako pomnožovaní půdy. Jsou nalévány obvykle do zkumavek. Nehodí se k jejich rozlišení bakterií.

Rozdělení živných půd podle konzistence Pevné půdy = agarové Tekuté půdy zahuštěné agarem (1,5-2%) nebo želatinou, případně koagulací bílkovin teplem (krevního séra, vaječné hmoty apod.). Plní se většinou do Petriho misek (agarová plotna) nebo do zkumavek v šikmé pozici (tzv. šikmý agar). Jsou vhodné k izolaci čistých kultur (izolační půdy). Polotuhé = semisolidní s přídavkem 0,1 až 0,5 % agaru

Rozdělení živných půd podle účelu jejich použití univerzální živné půdy selektivní živné půdy diagnostické živné půdy

Univerzální živné půdy Na těchto médiích roste velký počet fyziologicky různorodých mikroorganismů. např. kasein-sojový nebo masopeptonový agar pro chemoorganotrofní bakterie, sladina pro kvasinky a vláknité plísně.

Univerzální živné půdy – čokoládový agar, masopeptonový agar, masopeptonový krevní agar /

Selektivní živné půdy Tyto půdy podporují svým složením růst pouze určité skupiny mikroorganismů a ostatní potlačují. Selektivity se dosahuje přidáváním některých chemikálií (antibiotik, barviv) nebo úpravou pH. Používají se často v potravinářské mikrobiologii.

Selektivní živné půdy

Diagnostické živné půdy obsahují určitý substrát, který je schopna využívat pouze určitá skupina mikroorganismů, a indikátor, signalizující využívání tohoto substrátu. Mikroorganismy na těchto půdách rostou v charakteristických koloniích. Příkladem jsou živné agary pro koliformní bakterie McConkey agar, Tergitolový agar, VRB agar, Endův agar a další, které jsou určeny pro předběžnou detekci těchto mikroorganismů. Všechny obsahují určitý inhibitor růstu grampozitivních bakterií (koliformní bakterie jsou gramnegativní) a laktosu, která je koliformními bakteriemi rozkládána a jejíž rozklad je určitým způsobem detekován (obvykle barvou narostených kolonií).

Diagnostické živné půdy – Endův agar

Některé běžně užívané půdy Peptonová voda- nažloutlá barva, diagnostika cholery Živný bujon- žlutohnědá barva, příprava z masového extraktu a peptonu s malým přídavkem soli. Užívá se pro přípravu dalších půd. Živný agar- z bujonu s přídavkem 2% agaru, slouží ke kultivaci nenáročných mikrobů a k přípravě selektivních a diagnostických půd. Krevní agar- rudé barvy, je nejpoužívanější. K živnému agaru přidáváme 7% beraních ERY. Slouží k diagnostice patogenních bakterií které rozlišujeme dle jejich hemolytických vlastností. Čokoládový agar- hnědý, jedná se vlastně o KA který je zahřátý na 80°C, čímž se rozpadnou ERY a uvolní se růstové faktory, které jsou nutné pro růst náročnějších bakterií jako jsou Naisserie. Levinthalův agar- bohatá půda podobná živnému agaru, připravena filtrací čokoládového agaru. Slouží k diagnostice hemofilů.

Některé běžně užívané půdy Lővenstein- Jensenova půda- žlutě zelený šikmý agar, slouží k diagnostice TBC( kolonie jsou podobné květáku) Je to vaječná půda, růst je pomalý 3- 9 týdnů. Šulova půda- tekutá, nažloutlá, slouží k diagnostice mykoTBC, roste zde jako zrníčka sedimentu. Selenitová půda- tekutá růžovo oranžová, slabě kalná, selektivní pro salmonely. ENDOva půda- nejčastější půda, je růžová, obsahuje laktózu a cudin. Je to selektivně diagnostická půda- G+ nerostou, G- jako červené pokud zkvašují laktózu, pokud světle tak ji nezkvašují. MacConkeyho agar- podobá se ENDOvě půdě. XLD( xylóza-lyzin-deoxycholát sodný)- slouží k diagnostice salmonel. MAL(maltóza-arabinosa-lakton)- slouží k diagnostice salmonel.

Zdroje ni9_11.pdf ni9_11.pdf Veselá, M., Drdák, M.: Praktikum z obecné mikrobiologie, 1999, VUT Brno

Děkuji za pozornost !