Prezentace se nahrává, počkejte prosím

Prezentace se nahrává, počkejte prosím

SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ TVRDÝCH TKÁNÍ Nezhybová E., Kašpárková E., Machalová B., Wagner F. Ústav histologie a embryologie Lékařské fakulty.

Podobné prezentace


Prezentace na téma: "SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ TVRDÝCH TKÁNÍ Nezhybová E., Kašpárková E., Machalová B., Wagner F. Ústav histologie a embryologie Lékařské fakulty."— Transkript prezentace:

1 SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ TVRDÝCH TKÁNÍ Nezhybová E., Kašpárková E., Machalová B., Wagner F. Ústav histologie a embryologie Lékařské fakulty Univerzity Palackého v Olomouci

2 Úvod tvrdé tkáně představují pro běžná histologická vyšetření komplikaci s ohledem na nutnost demineralizace tkáně k tomuto účelu slouží zředěné kyseliny, které přeměňují nerozpustné soli v soli rozpustné ve vodě k zachování struktury a použitelnosti tkáně je nutné přesně dodržovat správné postupy

3 Cíle práce cílem naší práce bylo srovnat některé demineralizační postupy, poskytnout přehled speciálních barvení využitelných pro tvrdé tkáně a stanovit možnosti imunohistochemických vyšetření na tvrdých tkáních, které byly demineralizovány

4 Materiál a metodika jako materiálu jsme použili dospělých lidských zubů a kostí k dekalcifikaci jsme používali: elektrolytické odvápňování chelaton III Löwyho roztok jako barvících postupů jsme používali H.E., Schmorlovu reakci, azan, zelený trichrom, PAS a Saturnovou červeň dále jsme prováděli imunohistochemické reakce

5 Dekalcifikace (1) doba se řídí velikostí bločku a typem dekalcifikační tekutiny stupeň odvápnění určujeme vbodnutím jehly nebo chemicky /k 5 ml dekalcifikační tekutiny slité z odvápňované tkáně se přidá 5 ml 5% roztoku hydroxidu amonného a 5 ml 5% roztoku šťavelanu vápenatého/

6 Základní pravidla demineralizace tkáň musí být dobře fixována, jinak dochází k poškození tkáně (bobtnání) důkladné vyprání tkáně po fixaci ve vodě nebo etanolu odvápnění musí být rychlé /dostatečné množství dekalcifikační tekutiny, pravidelné vyměňování/ po odvápnění nutné dokonale vyprat tkáň od dekalcifikační tekutiny /nikdy nesmí ovšem přijít tkáň z dekalcifikačního roztoku do vody/

7 Dekalcifikace (2) elektrolytické odvápnění kyselina mravenčí, kyselina chlorovodíková, destilovaná voda chelaton III kyselina etylendiamintetraoctová (EDTA) Löwyho roztok 40% formaldehyd, chlorid rtuťnatý, ledová kyselina octová, destilovaná voda

8 Barvení tkáně hematoxylin – eosin (HE) Schmorlova reakce Saturnová červeň zelený trichrom azan PAS

9 substrát (DAB) I. protilátka buněčný antigen II. protilátka SA-P Nepřímá třístupňová imunohistochemická reakce, při které jsme použili primární protilátky proti kolagenu a Ab-1 (na makrofágy) Imunohistochemie

10 Výsledky - dekalcifikace nejkratší dobu trvání má dekalcifikace v Löwyho roztoku (cca 20 hodin), který je současně fixační tekutinou a výsledná barvení neovlivňuje, současně je vhodný i pro imunohistochemické zpracování tvrdé tkáně elektrolytické odvápnění je rovněž účinné, trvá několik dní a není k tvrdé tkáni příliš šetrné EDTA trvá několik měsíců, ale je nejšetrnější, dosáhnout zkrácení doby odvápnění lze přidáním 2% kyseliny mravenčí, poté je nutné tkáň vyprat v 5% roztoku formaldehydu

11 Zub – hematoxylin/eosin

12 Zub – Schmorlova reakce

13 Zub - azan

14 Zub – Goldnerův zelený trichrom

15 Zub - PAS

16 Zub – Saturnová červeň

17 Zub – ukázka imunohistochemie

18 Závěry (1) použití různých typů dekalcifikačních tekutin ovlivňuje délku demineralizace Löwyho tekutina usnadňuje postup, protože je současně i tekutinou fixační, jde o postup z hlediska odvápnění nejkratší a dostatečně šetrný chelaton III (EDTA) je postup dlouhý a pro rutinní laboratoř nevhodný

19 Závěry (2) při barvení tvrdých tkání lze použít různých speciálních postupů, které poskytují specifické výsledky a umožňují zobrazit potřebné jednotlivé struktury při šetrné dekalcifikaci lze na odvápněné tkáni úspěšně provádět imunohistochemická vyšetření, je ale třeba zvolit vhodný dekalcifikační prostředek

20 Děkujeme za pozornost


Stáhnout ppt "SPECIÁLNÍ METODY PŘI ZPRACOVÁNÍ A BARVENÍ TVRDÝCH TKÁNÍ Nezhybová E., Kašpárková E., Machalová B., Wagner F. Ústav histologie a embryologie Lékařské fakulty."

Podobné prezentace


Reklamy Google