Prezentace se nahrává, počkejte prosím

Prezentace se nahrává, počkejte prosím

Oddělení experimentální virologie Ústav hematologie a krevní transfuze, Praha Terapeutické vakcíny - nové poznatky Michal Šmahel.

Podobné prezentace


Prezentace na téma: "Oddělení experimentální virologie Ústav hematologie a krevní transfuze, Praha Terapeutické vakcíny - nové poznatky Michal Šmahel."— Transkript prezentace:

1 Oddělení experimentální virologie Ústav hematologie a krevní transfuze, Praha Terapeutické vakcíny - nové poznatky Michal Šmahel

2 Terapeutické vakcíny proti HPV??? + částečné pokrytí populace vakcinací + typy HPV neobsažené ve vakcíně + proklouznutí imunizaci + nádory u již infikovaných se objeví za několik let

3 Pokroky ve vývoji terapeutických vakcín??? NIC - MOC PROČ? účinnost imunizace účinek v klinických zkouškách ZLEPŠENÍ JAK?

4 Východiska, předpoklady  častá spontánní regrese  imunitní buňky v regredujících lézích  cirkulujicí specificky stimulované imunitní buňky  zvýšený výskyt nádorů při poruše imunity Virové proteiny = nádorové antigeny

5 Infekce HPV regrese progrese maligní nádor 99% 1% persistentní infekce genet. predispozice kofaktory prostředí únik imunitě hostitele

6 HPV – evolučně staré mechanismy úniku imunitě replikační strategie HPV aktivní tlumení imunity

7 Replikační strategie HPV  infekce bazálních keratinocytů, ne APC  nelyzují hostitelské buňky  bez viremie (nedostávají se do krve)  časné antigeny hlavně jádře  produkce pozdních antigenů minimalizována  vyvolání tolerance expozicí antigenů v nezánětlivém prostředí

8 Utlumení funkce interferonů E6 - vazba na transkripční faktor IRF-3  zabránění aktivace tvorby IFN-α,β - vazba na Tyk2  inhibice signálů vyvolaných IFN-α E7 - vazba na transkripční faktor IRF-1  zabránění aktivace tvorby IFN-β E6,E7 - po uvolnění z buněk snižují tvorbu IFN-γ v buňkách NK

9 Rozpoznání nádorové buňky lymfocyty Tc tumor cell

10 Zpracování antigenu a prezentace pomocí MHC-I endoplasmatic reticulum Golgi apparatus transport vesicle proteasome TAP-1 TAP-2 MHC-I 2m2m LMP-2 LMP-7 peptides

11 Vliv HPV na prezentaci antigenů E5  inhibice tvorby MHC I. třídy  inhibice přesunu MHC-I na povrch E7  inhibice promotoru MHC-I  inhibice promotoru LMP-2/TAP-1

12 Hlavní únikové mechanismy nádorů  snížení exprese MHC I. třídy  snížení produkce nádorového antigenu  změna sekrece imunomodulačních faktorů  zvýšená odolnost k apoptose

13 nestabilita genomu premaligních buněk hromadění mutací maligní buňky imunitní dozor onkoprotein E6 inaktivuje p53 unikající imunitě

14 Terapeutické HPV vakcíny Cíl: buněčná imunita proti nestrukturálním antigenům  E1, E2 - v počátcích infekce - po integraci často zrušeny  E6, E7 - onkogeny - přítomny stále

15 Strategie terapeutických vakcín 1. Peptidové/proteinové vakcíny 2. DNA/RNA vakcíny 3. Vakcíny využívající živých vektorů 4. Buněčné vakcíny 5. Rostlinné vakcíny

16 Peptidové vakcíny

17 Proteinové vakcíny Izolované proteiny (z bakterií) E7GST/algammulin TA-GW (HPV6 L2-E7) - Xenova TA-CIN (HPV16 L2-E6-E7) - Xenova HspE7 – Stressgen E6E7-IMX – CSL Ltd. PD-E7/AS02 - GSK

18 DNA vakcíny „Nahá“ nebo v komplexu - s polymery - s lipidy Problémy s E6 a E7: - onkogennost - malá imunogennost

19 Onkogennost E6 a E7 Možnosti řešení:  kousky genu kodující epitopy  promíchaný gen  mutovaný gen

20 PROTEIN E7GGG C-X-X-C C-X-X-C vazba na pRB CK II Konzervovaná oblast 1 Konzervovaná oblast 2 AA115/16 37/38 98 Doména vázající zinek TG 21 LYG 24 YG 26 Q TD 21 LYC 24 YE 26 Q E7GGG HPV16 E7

21 Promíchaný (shuffled) E7 Osen et al., Vaccine Jul 20;19(30):

22 Imunogennost E6 a E7 Možnosti zvýšení  modifikace genu - změna sekvence epitopů - změna stability proteinu - změna zastoupení kodónů  konstrukce fúzních genů

23 Fúzní geny Mechanismy účinku:  změna buněčné lokalizace  nasměrování do dráhy MHC-I  nasměrování do dráhy MHC-II  přenos mezi buňkami  zvýšení degradace proteinu  dodání pomocných epitopů

24 PROTEIN Sig/E7/LAMP-1 Signální peptid AA1 29/30 127/ HPV16 E Tyr-Gln-Thr-Ile endoplazmatické retikulum endozomy lysozomy Lysosome-associated membrane protein 1 (LAMP-1) Wu et al.: Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92, , 1995

25 Zvýšení účinnosti DNA vakcín  Adjuvans  Způsob aplikace  Geny pro imunostimulační molekuly  Prodloužení přežívání DC  Kombinace s jiným typem vakcíny (heterologní „prime-boost“)

26 Klinické zkoušky DNA vakcín ZYC101 - Zycos - HPV16 E6 a E7 - enkapsulovaná plasmid. DNA [poly (lactide-co-glycolide)]

27 Živé vakcínové vektory Bakterie Listeria monocytogenes Salmonella BCG Viry Virus vakcinie Adenoviry Adeno-asociované parvoviry (AAV) Alfaviry

28 Klinické zkoušky rVV TA-HPV (HPV16/18 E6/E7) – Xenova HPV16 E2 – Mexico MVA-HPV-IL2 (HPV16 E6,E7) - Transgene Heterologní prime-boost TA-HPV (rVV) + TA-CIN (protein)

29 Varianty HPV v genu E6 Selektované pod tlakem imunitního dozoru  snížení prezentace antigenů KORELACE SE ZVÝŠENOU ONKOGENNOSTÍ R10G - v epitopu HLA-B7 - zvýšený výskyt u pacientů s HLA-B7 L83V - v epitopu HLA-B44 - výskyt spojen s progresí nádorů

30 Příprava imunorezistentních klonů TC-1 Imunizace myší proti antigenu E7 DNA vakcínou Podkožní podání nádorových buněk TC-1 Odvození buněčných linií z nádorů Klonování linií in vitro

31 Imunosenzitivita klonů z nádoru TC-1 TC-1/E7GGG 5/5 0/5 TC-1/B7 5/5 0/5 TC-1/C6 5/5 5/5 TC-1/F9 5/5 5/5 TC-1/C1 5/5 0/5 TC-1/E4 5/5 5/5 TC-1/B6 5/5 5/5 pBSC E7GGG.GUS Buněčná linie

32 Sekvenace E7 v klonech TC-1 TC-1 TC-1/C6 N53S

33 Predikce vazby peptidu na MHC-I H2-D b score RAHYNIVTF82 RAHYSIVTF49 Binding threshold: 53

34 Infekce HPV regrese progrese imunita únik premaligní léze maligní Tu regreseprogreseregreseprogrese vakcinace Současnost

35 Infekce HPV regrese progrese imunita únik premaligní léze maligní Tu regreseprogreseregreseprogrese chemo+imuno Budoucnost?


Stáhnout ppt "Oddělení experimentální virologie Ústav hematologie a krevní transfuze, Praha Terapeutické vakcíny - nové poznatky Michal Šmahel."

Podobné prezentace


Reklamy Google