Marie Černá, Markéta Čimburová, Marianna Romžová

Slides:



Advertisements
Podobné prezentace
Kvantitativní analýza
Advertisements

IZOLACE A CHARAKTERIZACE PROTEINŮ
Radiační příprava práškových scintilátorů Jakub Kliment Katedra Jaderné chemie FJFI ČVUT Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti.
Optické metody Metody využívající lom světla (refraktometrie)
Kapilární elektroforéza v nevodném prostředí - NACE
Vyšetřování parametrů humorální imunity
PCR. Polymerase chain reaction PCR Je technika, která umožňuje v krátkém času namnožit daný kus DNA bez pomoci buněk užívá se, pokud je DNA velmi malé.
Separační metody.
Tento výukový materiál vznikl v rámci Operačního programu Vzdělávání pro konkurenceschopnost 1. KŠPA Kladno, s. r. o., Holandská 2531, Kladno,
Nutný úvod do histologie
Biochemické metody separace proteinů
Oddělování složek směsí.
Izolace RNA z živočišné tkáně
Chromatografie Chromatografické dělení je založeno na distribuci separované látky mezi mobilní a stacionární fázi Richard Vytášek 2009.
(genové mutace, otcovství, příbuznost orgánů při transplantacích) RNA
WEHNELTOVA TRUBICE.
Experiment: Test na přítomnost patogenu ve vodě z mytí brambor pomocí PCR.
Kvalitativní a kvantitativní analýza – chromatografie
Stanovení bílkovin séra na analyzátorech turbidimetrie, nefelometrie
Jak chránit DNA před zářením R. Čermák 1, V. Kanclíř 2, J. Kratochvíl 3 1 Gymnázium F. V. Sasinka, Námestie slobody č. 3, Skalica 2 Gymnázium Turnov, Jana.
Studium aktinu, mikrofilamentární složky cytoskeletu pomocí dvou metod:
chromatografické metody adsorpce - fyzikální, chemická
ELISA, určení ideálních koncentrací reaktantů -různé varianty
Nukleové kyseliny Přírodní látky
Western blotting slouží pro identifikaci polypeptidů prostřednictvím protilátek obvykle následuje po rozdělení polypeptidů v elektrickém poli polyakrylamidovou.
Chemické výpočty II.
Metody imunodifuze a precipitace v gelech
Analýza a separace nukleových kyselin
Dělící techniky nukleových kyselin
Imunochemické metody řada metod založených na principu reakce:
Vlastnosti plynů a kapalin
Elektroforéza proteinů krevního
PCR Polymerase Chain Reaction
Kvantifikace nukleových kyselin
DNA diagnostika II..
Ochrání alkohol DNA před zářením?
Mária Ol’hová, Veronika Frkalová, Petra Feberová
Sacharidová složka nukleotidů
ELEKTROFORETICKÉ METODY
Optické metody spektrofotometrie.
Matúš Mihalčin Ayoub Amleh Khaled M. Alhibeedi
Moderní metody buněčné biologie
DNA diagnostika a principy základních metod molekulární biologie
V praktiku budou řešeny dvě úlohy:
Molekulární biotechnologie č.10a Využití poznatků molekulární biotechnologie. Molekulární diagnostika.
Western blotting Slouží pro detekci proteinů prostřednictvím protilátek. Obvykle následuje po rozdělení polypeptidů v elektrickém poli polyakrylamidovou.
PRŮKAZ NUKLEOVÉ KYSELINY Lékařská mikrobiologie – cvičení, jarní semestr 2016 Mikrobiologický ústav LF MU
1 Metody molekulární biologie ve forenzní genetice Jana Vlasáková.
Imunochemické metody Metody využívající vazbu mezi antigenem a protilátkou Vytášek 2008.
Zjištění molekulární hmotnosti zeleně fluoreskujícího proteinu (GFP)
Environmentální aplikace molekulární biologie
Manipulace s DNA Manipulace s proteiny Analýza genové exprese
MOLEKULOVÁ ABSORPČNÍ SPEKTROFOTOMETRIE v UV a viditelné oblasti spektra 2.
Poškození DNA vlivem ionizujícího záření
Iontová chromatografie
SEPARAČNÍ METODY ÚVOD Význam SM– výskyt studovaných látek ve směsích
ADSORPCE na fázovém rozhraní pevná fáze-plyn.
Centrifugace.
NÁZEV ŠKOLY: ČÍSLO PROJEKTU: NÁZEV MATERIÁLU: TÉMA SADY: ROČNÍK:
Oddělování složek směsí.
Typy molekul, látek a jejich vazeb v organismech
Izolace genomové DNA Základní kroky: Biologický materiál:
SDS-PAGE Protokol experimentu
Laboratorní diagnostika
Western blotting Slouží pro detekci proteinů prostřednictvím protilátek. Obvykle následuje po rozdělení polypeptidů v elektrickém poli polyakrylamidovou.
Dominika verešová Kateřina Sapáková
ADSORPCE na fázovém rozhraní pevná fáze-plyn.
princip extrakce DNA (jahody)
MOLEKULOVÁ ABSORPČNÍ SPEKTROFOTOMETRIE v UV a viditelné oblasti spektra 2.
WEHNELTOVA TRUBICE.
Transkript prezentace:

Marie Černá, Markéta Čimburová, Marianna Romžová DNA izolace Marie Černá, Markéta Čimburová, Marianna Romžová

DNA izolace Základní kroky Lýze buněk Odstranění proteinů - proteáza - adsorpce nebo extrakce Precipitace DNA etanolem Rozpuštění DNA ve vodě či v pufru

DNA izolace Tři základní metody Extrakce fenol-chloroform (rozdílná rozpustnost v roztocích) Vysolovací metoda (precipitace proteinů pomocí NaCl) Adsorpční metoda (silikagelová membrána)

Čistota a koncentrace DNA Spektrofotometrie Absorbční maximum pro nukleové kyseliny 260 nm pro proteiny 280 nm Koncentrace DNA – při 260 nm Čistota DNA: poměr 260/280 nm

Čistota a koncentrace DNA Fluorescentní barvy DNA s navázanými barvami se v gelu zviditelní (etidium bromid) Gel obsahuje DNA standardu (jejíž koncentrace je předem stanovena) Porovnání dvou světelných intensit – standardy a našeho vzorku

Gelová elektroforéza Separační metoda Gel – síťovitá struktura polymerních molekul s póry Gel - agaróza - polyakrylamid Etidium bromid je barva vázající se do DNA Vytváří komplex excitující fotony po expozici UV

Gelová elektroforéza Separační metoda PRINCIP: pohyb nabitých molekul v elektrickém poli pohyb ve směru od – k + (nukleové kyseliny obsahují negativně nabité fosfátové skupiny) Rychlost pohybu DNA závisí na délce DNA fragmentu nepřímo úměrně Délka neznámých fragmentů se porovnává s délkou standardních fragmentů