Stáhnout prezentaci
Prezentace se nahrává, počkejte prosím
1
Centrifugace
2
Literatura
3
Centrifugace Důvodem použití centrifug je nutnost urychlit sedimentaci pevných částic v kapalném prostředí. Na sedimentaci má vliv vlastnost látky: velikost, tvar, hustota 2. vlastnost prostředí (rozpouštědla): hustota, viskozita
4
Centrifugace 20. léta 20. století - Svedberg - počátky laboratorních centrifug a analytické centrifugace; teoretické základy metody 50. léta - Brakke - centrifugace v gradientu hustoty Současnost - znovuobjevení analytické ultracentrifugace
5
Theodor Svedberg (1884-1971) Nobelova cena za chemii 1926
pojmenována po něm Svedbergova jednotka pro vyjádření sedimentačního koeficientu
6
Centrifugace Odstranění hrubých částic z roztoku
Sediment (pelet) – supernatant Izolace organel nebo biomakromolekul Stanovení základních parametrů – MW, hustota, sedimentační koeficient
7
Použití
8
Rozdělení centrifug
9
Otáčky g - uhlová rychlost (rad/s) rad f – otáčky/min
10
Otáčky g rad
11
Preparativní centrifugace
12
Metody nanášení vzorku
13
Preparativní centrifuga
14
Preparativní centrifuga
15
Preparativní ultracentrifuga
16
Rotory Úhlový – diferenciální centrifugace
Výkyvné – zonální centrifugace Zonální – bez kyvet, vzorek je uvnitř rotoru
17
Úhlový rotor
18
Diferenciální centrifugace
opakovaná centrifugace se zvyšující se rychlostí otáček = gravitací
19
Výkyvný rotor
20
Gradientová centrifugace
Hustotní bariera Diskontinuální Kontinuální
21
Gradientová centrifugace
Hustotní bariera Diskontinuální Kontinuální
22
Gradientová centrifugace média
Kriteria pro výběr centrifugačního media: musí v roztoku tvořit gradient nesmí interferovat se vzorkem musí být lehce odstranitelné ze vzorku
23
Gradientová centrifugace média
Sacharosa Glycerol Ficoll - dextran Percoll – SiO2 CsCl Cs2SO4 Hypertonické prostředí Nutno připravit gradient Gradient vzniká během centrifugace
24
Gradientová centrifugace
25
Gradientová centrifugace
26
Gradientová centrifugace
27
Gradientová centrifugace
28
Diferenciální versus gradientová centrifugace
29
Zonální rotor
30
Zonální rotor
31
Centrifugace se zonálním rotorem
32
Centrifugace se zonálním rotorem
33
Centrifugace se zonálním rotorem
34
Analytická ultracentrifugace
35
Analytická ultracentrifugace
36
Analytická ultracentrifuga
37
Optický systém
38
Optický systém
39
Optický systém Absorbční optický systém
UV-VIS od 200 do 800 nm detekce makromolekul obsahujících silný chromofor Rayleighův interferenční optický systém měří změny indexu lomu analýza makromolekul neobsahujících silný chromofor (např.polysacharidů) nebo vzorků obsahujích v pufru silně absorbující látky (např.ATP/GTP, DTToxidovaný)
40
Optický systém Zkřížená optika Interferenční optika Fotografiký systém
Absorbční systém
41
Analytická ultracentrifugace
42
Metoda sedimentační rovnováhy
43
Metoda sedimentační rovnováhy
44
Metoda sedimentační rovnováhy
Termodynamické informace Experimentaálně lze stanovit : Relativní molekulovou hmotnost Mr Stav molekul v roztoku - asociace Rovnovážné konstanty v roztoku K výpočet volné energie asociačních reakcí
45
Metoda sedimentační rychlosti
46
Metoda sedimentační rychlosti
47
Metoda sedimentační rychlosti
Hydrodynamické parametry Experimentálně lze stanovit : Sedimentační koeficient s Difuzní konstantu D nebo frikční faktor f Relativní molekulovou hmotnost Mr Tvar molekuly v roztoku
Podobné prezentace
