Histologické zpracování trepanobiopsií na Ústavu patologie FN Olomouc Bártová M., Vodičková L., Novotná D., Faltýnková A.

Bioptické zpracování trepanobiopsií Proč se provádí? U pacientů s chorobami krvetvorby nádorového původu nenádorového původu

Odběr materiálu, jeho fixace a odvápnění Materiál se odebírá z lopatky kosti kyčelní Hned po odběru se materiál vkládá do fixačního roztoku Používáme Lőwyho roztok, který tkáň současně fixuje a odvápňuje

Příprava Lőwyho roztoku Formaldehyd 40% 100ml HgCl2 20g Kyselina octová ledová 50ml Destilovaná voda 850ml Postup přípravy: 20g chloridu rtuťnatého rozpustíme v 60ml vařící destilované vody. Přidáme 100ml 40% formaldehydu, 50ml kyseliny octové ledové a zbývající destilovanou vodu Lőwyho roztok skladujeme při 4°C Roztok je toxický – pozor při manipulaci!

Použití Lőwyho roztoku Materiál se vkládá do tohoto roztoku již při odběru na oddělení Je nutné, aby byl uveden přesný čas vložení tkáně do Lőwyho roztoku Doba fixace a odvápnění se pohybuje mezi 20-24 hodinami

Další zpracování trepanobiopsií Po 20-24 hodinách se vzorek tkáně zpracovává stejně jako jiný bioptický materiál V konečné fázi zpracování získáme parafinový blok Následuje krájení řezů silných 2-3m Rutinně u nás zhotovujeme 7 preparátů z každého vzorku a barvíme metodami: Hematoxylin-eosin PAS reakce Perlsova metoda Giemsa Gőmory Unna-Papenheim Naftol-ASD-chloracetátesteráza

Barvení hematoxylin-eosin Základní barvení pro orientaci ve tkáni Výsledek: jádra – tmavě modře cytoplazma – růžově červené Používáme Weigertův železitý hematoxylin

HE 100×

HE 200×

PAS reakce PAS reakcí se dobře zvýrazní megakaryocyty, jejichž cytoplazma se barví červenofialově.

PAS 400×

Průkaz železitého pigmentu Perlsovou metodou Umožňuje zhodnocení přítomnosti pigmentu – hemosiderinu – ve stromálních makrofázích a někdy v erytroblastech Výsledek: železo – modře buněčné pozadí – v růžovém tónu

Fe 200×

Fe 400×

Giemsovo barvení Dobře vykresluje buněčné struktury Identifikuje mastocyty Výsledek: eosinofilní složky – v různých odstínech růžové až červené bazofilní složky – v různých odstínech světle modré, až tmavě modré

Giemsa 100×

Giemsa 200×

Metoda Gőmory – impregnační metoda Znázorňuje síť retikulárních vláken stromatu a umožňuje tak posoudit kvantitu retikulárních vláken Za některých patologických stavů, například u myeloproliferativních onemocnění, dochází k výraznému zmnožení retikulárních vláken, někdy i kolagenních vláken až do obrazu dřeňové fibrózy = zvazivovatění Výsledek: retikulární vlákna – černě jádra – červeně

Gömory 320×

Gömory 400×

Metoda Unna-Papenheim Výsledek: cytoplazma plazmocytů – růžově červeně erytroblasty (hnízda erytropoézy) – růžově červeně

Elias 640×

Průkaz naftol-ASD-chloracetátesterázy U této metody je důležité barvící roztoky připravovat vždy čerstvé, těsně před použitím Důležité je pH roztoků, pokud neodpovídá požadované hodnotě pH 6.3, musí se upravit Tato metoda je velice citlivá a je nutné dodržovat přesný postup Dobarvení metylzelení Výsledek: bílá krevní řada a mastocyty – červeně ostatní buněčné elementy – zeleně

CLAE 40×

CLAE 100×

CLAE 200×

Aplikace imunohistochemických metod Výsledek imuno metod je po fixaci a odvápnění v Lőwyho roztoku velmi dobrý Využití zejména u lymfoproliferativních chorob Nejčastěji prokazované antigeny: CD20; CD3; CD5; CD23; CD68; CD10; CD138; Bcl-2 Kappa, lambda – lehké řetězce imunoglobulinů, IgA, IgG, IgM MPO-myeloperoxidáza – prokazuje bílou krevní řadu

Děkuji za pozornost