Nové laboratorní metody v patologii Fingerlandův ústav patologie Lékařská fakulta UK a Fakultní nemocnice Nové laboratorní metody v patologii

patologie klasické pojetí: autopsie + nekroptická histopatologie nové pojetí: biopsie na prvním místě! při zpracování materiálu časté uplatnění automatů nové informační systémy (počítačové databáze, kartotéky, propojování jednotlivých oddělení...)

vzorek pro bioptické vyšetření odběr tkání k bioptickému vyšetření: operace: odběr velkých částí tkáně, často následuje až v druhé době, po některém z dále uvedených samovolné vyloučení: krev, hlen, sputum... probatorní excize (zkusmé vyříznutí): u klinicky nejasných nálezů, další postup závisí na výsledku bioptického vyšetření probatorní punkce (zkusmé nabodnutí tlustou jehlou): obdobné předchozímu, hlavně u těžko dostupných oblastí (mediastinum, retroperitoneum...) kyretáž (výškrab): dutina děložní, procesy v kostech... endoskopická excize: odběr tkáně v průběhu vyšetření dutých orgánů fibroskopy

vzorek pro bioptické vyšetření materiál k bioptickému vyšetření: tkáně nefixované x fixované fixační činidla: 10% formalin (= 4% roztok formaldehydu): nejpoužívanější, vhodný pro klasickou světelnou mikroskopii a imunohistochemické vyšetření, dlouhodobé uchování tkání absolutní ethanol: možno použít pro vyšetření tkáně molekulárními metodami glutaraldehyd: pro elektronovou mikroskopii, pouze krátkodobé uchování tkání kryokonzervace (zmražení při -72st.C): dlouhodobé uchování tkání, použitelné pro molekulární metody

vzorek pro bioptické vyšetření dostatečné množství fixativa – 10 až 20 násobek objemu tkáně!!! fixace matriálu ihned!!! vhodná přepravní nádoba materiál obklopen fixativem ze všech stran snadná manipulace s materiálem (tkáň po fixaci ztuhne ve výchozím tvaru!) označení materiálu bioptická průvodka označení materiálu (štítek s čitelnými údaji: jméno, příjmení, RČ, odesílající oddělení a klinika)

vzorek pro bioptické vyšetření příjem materiálu na oddělení patologie → bioptické číslo neustálá kontrola, vyvarování se záměny!

vzorek pro bioptické vyšetření zpracování materiálu pro vyšetření světelným mikroskopem: blokování: z větších částí tkání zhotovení bloků cca 1,5 x 1 x 0,5 cm odvodnění a prosycení parafinem krájení: řezy 5-7 μm odparafinování, zavodnění a barvení: hematoxylin-eozin: nejběžnější další speciální metody

světelná mikroskopie stavebnicový model mikroskopu – možnost přidávat další zařízení dle potřeby, bez nutnosti pořizování celého nového mikroskopu (speciální typy objektivů, kamery...) morfometrie – speciální software pro kvantifikaci obrazových údajů (průměr, plocha...) diskuzní zařízení – „vícehlavé“ mikroskopy (konzultace, výuka...) telepatologie, virtuální preparáty... – speciální vybavení a software, možnost konzultovat nejasné či zajímavé případy i na velkou vzdálenost, rychlé, bez nutnosti odesílat skla či tkáňové bločky

elektronová mikroskopie speciální, náročná příprava materiálu dnes hlavně pro: ledviny – glomerulonefritidy střevo – céliakie průkaz virů a některých parazitů +/- vyšetření krve – vlasatobuněčná leukémie technika: prozařovací, rastrovací

histochemie průkazy enzymů u vrozených chorob

imunohistochemie průkazy antigenů pomocí vazby značených protilátek metody: a) přímá imunofluorescence: nativní (nefixované) preparáty navázání protilátky značené fluorochromem → sledování ve fluorescenčním mikroskopu b) nepřímá imunofluorescence: značená je až sekundární protilátka (protilátka proti primární protilátce) – znásobení signálu u tkání fixovaných formalinem c) nepřímá imunohistochemie: sekundární protilátka je označená enzymem (křenová peroxidáza) → po reakci s chromogenem (barvivo) → výsledná, barevně stálá reakce (hnědá, červená)

molekulární metody FISH, CISH PCR FACS cytogenetika

molekulární metody...ISH ISH = in situ hybridizace použití značených sond, které se naváží (hybridizují) na odpovídající (komplementární) úseky nukleových kyselin sondy značené barvivem (CISH) či fluorescenčním barvivem (FISH) např.: karcinom prsu: amplifikace genu HER2/neu

molekulární metody...PCR PCR = polymerázová řetězová reakce amplifikace (zmnožení) hledaných úseků DNK a jejich identifikace, např. elektroforézou

molekulární metody...FACS FACS = průtoková cytometrie buňky značeny fluorescenčními barvivy → průchod tenkou kapilárou se současným snímáním fluorescenčních signálů umožňuje současnou detekci několika antigenů na jedné buňce (x imunohistochemie – většinou pouze jeden antigen) kromě kvalitativní analýzy (přítomnost markeru ano či ne?) i kvantifikace (kolik buněk má dané vlastnosti? např.: hematologická onemocnění

molekulární metody...cytogenetika chromozomální analýza, klasická cytogenetika změny v počtu a uspořádání chromozomů např.: Downův syndrom: trizomie 21 chronická myeloidní leukémie: translokace 9;12 = Philadelphia chromozóm

cytologie viz samostatný seminář

literatura Bártová, J.: Patologie (pro bakalářské studium ošetřovatelství), Praha, Karolinum, 1996 Bednář, B. a kol.: Patologie I-III, 2. vyd., Praha, Avicenum, 1982 Cotran, RS., Kumar, V., Robbins, SL.: Robbins Basic Pathology. 7th ed. Philadelphia, London, Toronto, Montreal, Sydney, Tokyo: W.B. Saunders Company, 2003 Mačák, J., Mačáková, J.: Patologie, Praha, Grada, Avicenum, 2004 Povýšil, C., Šteiner I., Dušek, J.: Speciální patologie I. díl, 1. vyd., Praha, Univerzita Karlova – Karolinum, 1995 Povýšil, C., Šteiner I., Dušek, J.: Speciální patologie III. díl, 1. vyd., Praha, Univerzita Karlova – Karolinum, 1999 Povýšil, C., Stejskal, J., Kodet, R., Povýšilová, V., Motlík, K., Chlumská, A., Pastrňák, A., Dudorkinová, D. .: Speciální patologie II. díl, 1. vyd., Praha, Univerzita Karlova – Karolinum, 1997