Darina Čejková Martina Dvořáčková Zuzana Schmidtová Zuzana Špicarová

Prezentace na téma: "Darina Čejková Martina Dvořáčková Zuzana Schmidtová Zuzana Špicarová"— Transkript prezentace:

1 Darina Čejková Martina Dvořáčková Zuzana Schmidtová Zuzana Špicarová
Možnosti fluorescenční hybridizace in situ při detekci Ph chromozómu u pacientů s chronickou myeloidní leukémií Darina Čejková Martina Dvořáčková Zuzana Schmidtová Zuzana Špicarová

2 Chronická myeloidní leukémie (CML)
myeloproliferativní nádorové onemocnění vzniká neoplastickou transformací pluripotentní kmenové buňky 3 stádia: chronická fáze, fáze akcelerace a blastický zvrat

3 Philadelphský chromozóm
cytogentický marker CML 60. léta 20. století Nowell a Hungerford vzniká reciprokou translokací t(9;22)(q34;q11) fúzní gen BCR/ABL chimérický protein s tyrozinkinázovou aktivitou

4 Philadelphský chromozóm

5 Translokace t(9;22)

6 Philadelphský chromozóm
85% pacientů s CML je Ph+ z toho % variantní Ph chromozóm - t(1;9;22), t(8;9;22), t(9;12;22) 45% pacientů s variantním Ph chromozómem delece v sousedství zlomů 17% klasických Ph+ delece 5 - 10% pacientů s CML Ph-

7 Philadlephský chromozóm
blastický zvrat je provázen sekundárními genomovými přestavbami: +8, i(17q), +19, extra Ph maskovaný Ph chromozóm: nelze identifikovat Ph chromozóm, ale fúzní gen BCR/ABL je přítomen

8 Stanovení Ph chromozómu
G-pruhování Southern blotting Northern blotting Western blotting PCR RT-PCR FISH

9 Fluorescenční in situ hybridizace (FISH)
interfázní FISH (I-FISH) metafázní FISH (C-FISH) hypermetafázní FISH (HM-FISH) dual color FISH (D-FISH) four color FISH (F-FISH) multi color FISH (M-FISH)

10 D-FISH 2 odlišně zbarvené sondy (červená, zelená)
vzniká fúzní signál (žlutá) normální buňky 2 zelené a 2 červené signály Ph+ červený, zelený a fúzní žlutý signál snížení falešné pozitivity - extrasignál

11 D-FISH s extrasignálem
snížení falešné pozitivity sondy překrývající místa zlomu BCR v případě Ph+ zelený žlutý a 2 červené signály

12 D-FISH signál-segregační strategie
vysoká citlivost nízká falešná pozitivita sondy hybridizují s oblastmi sousedícími s geny BCR a ABL normální buňky 2 červené a 2 zelené signály Ph+ červený, zelený a 2 žluté signály

13 D-FISH signál-segregační strategie

14 F-FISH sondy hybridizují s oblastmi sousedícími s geny BCR a ABL
každá sonda má jinou barvu (červená, modrá, zelená, žlutá) normální buňka: 2 signály žlutá/zelená a 2 signály červená/modrá Ph+ všechny čtyři varianty

15 F-FISH

16 M-FISH