MOLEKULÁRNÍ A KLINICKÉ MARKERY PRO DIAGNOSU A LÉČBU VON WILLEBRANDOVY CHOROBY EVROPSKÁ KOORDINOVANÁ STUDIE Habart David, Dudlová Jana, Suttnar Jiří, Vorlová Zdena Ústav hematologie a krevní transfuse, U nemocnice 1, Praha 2, ČR Koordinátor: Peake Ian R, Hallamshire Hospital, Sheffield University, UK

Nepochybná diagnosa typu 1 vWD klinicky významné mukosní/kožní krvácení vWF <20% positivní rodinná anamnesa, vysoká penetrance Možná diagnosa typu 1 vWD chybí jedno ze tří kriterí DIAGNOSA TYPU 1 VWD ZŮSTÁVÁ NEJEDNOZNAČNÁ

heterozygotní nosičství mutací typu 3 vWD: předčasný stop kodon, delece dominantní negativní efekt: produkt abnormální alely genu vWF vede k retenci vWF v ER (záměnné mutace) modifikující geny: AB0 system ektopická exprese N-acetylgalactosaminyltransferasy u myšího kmene RIIIS/J ETIOPATOGENESA TYPU 1 VWD ZŮSTÁVÁ VE VĚTŠINĚ PŘÍPADŮ NEJASNÁ

upřesnit laboratorní diagnostiku a stanovit míru chybně stanovené diagnosy v různých částech Evropy porovnat efektivitu různých technologií pro hledání mutací ve velkých a komplexních genech jako je gen pro vWF zhodnotit vztah mezi typem 1 vWD a haplotypy genu vWF stanovit proporci nemocných u nichž vWD není vázána na gen vWF podpořit nesubstituční terapii vWD (DDAVP) CÍLE

LABORATOŘE PODÍLEJÍCÍ SE NA STUDII Sheffield Vizenza Milano INSERM Lille Leiden Hamburg Arhus ÚHKT Lund/Malmo Leicester Birmingham UK Itálie Francie Holandsko Německo Dánsko ČR Švédsko UK

ROZVRŽENÍ STUDIE Nábor rodin a kontrol Základní testy Konfirmační testy Specialisované testy Vazebné rodinné studie Haplotypová analysa Detekce mutací AB0 genotyp Exprese kandidátních mutací DDAVP Analysa dat Zavěrečná zpráva WP1 WP2 WP3 WP4 WP5 WP6 WP7 WP8 WP9 WP10 WP11 WP rodin, 1200 kontrol FVIII:C, vWF:Ag, vWF:RiCo, multimery, RIPA, PFA, isolace DNA vWF:FVIIIB, trombocytární vWF STR nukleotidové a aminokyselinové polymorfismy CSGE, HPLC, přímá sekvenace vztah mezi krvácením, laboratoním nálezem a molekulárním defektem

VSTUPNÍ KRITERIA typ 1 vWD (lokální diagnosa)  2 nemocní v rodině  4 zdraví příbuzní  2 generace

ROZVRŽENÍ STUDIE Nábor rodin a kontrol Základní testy Konfirmační testy Specialisované testy Vazebné rodinné studie Haplotypová analysa Detekce mutací AB0 genotyp Exprese kandidátních mutací DDAVP Analysa dat Zavěrečná zpráva WP1 WP2 WP3 WP4 WP5 WP6 WP7 WP8 WP9 WP10 WP11 WP12

indexový nemocný F1 F10 F11 F12 F13 F14 F15 F16 F17 F2 F3 F4 F5 F6 F7 F8 I 2 II 1 I 1 II 2 III1 II2 I1 IV3 II2 I 1 I 2 II 1 II2 III 2 II 1 I 1 BT 4,35 7, ,38 12,00 15,00 7,35 4, ,32 15, ,00 FVIII:C vWF:Ag vWF:RiCo RiCo/Ag 1,2 1,0 2,1 1,5 0,9 0,8 1,2 0,7 0,6 1,1 0,7 0,4 0,9 0,4 vstupní laboratorní nález 16 indexových nemocných ZAŘAZOVÁNÍ RODIN DO STUDIE vytipované rodiny přislíbené rodiny nabrané rodiny

F8 F7F6 F5F4 F3

F2F1F10 F11 F12F13

F14 F15F17 F16

ROZVRŽENÍ STUDIE Nábor rodin a kontrol Základní testy Konfirmační testy Specialisované testy Vazebné rodinné studie Haplotypová analysa Detekce mutací AB0 genotyp Exprese kandidátních mutací DDAVP Analysa dat Zavěrečná zpráva WP1 WP2 WP3 WP4 WP5 WP6 WP7 WP8 WP9 WP10 WP11 WP12

DETEKCE MUTACÍ A POLYMORFISMŮ POMOCÍ HPLC

ROZVRŽENÍ STUDIE Nábor rodin a kontrol Základní testy Konfirmační testy Specialisované testy Vazebné rodinné studie Haplotypová analysa Detekce mutací AB0 genotyp Exprese kandidátních mutací DDAVP Analysa dat Zavěrečná zpráva ÚHKT WP1 WP2 WP3 WP4 WP5 WP6 WP7 WP8 WP9 WP10 WP11 WP rodin, 1200 kontrol FVIII:C, vWF:Ag, vWF:RiCo, multimery, RIPA, PFA, isolace DNA vWF:FVIIIB, trombocytární vWF STR nukleotidové a aminokyselinové polymorfismy CSGE, HPLC, přímá sekvenace vztah mezi krvácením, laboratoním nálezem a molekulárním defektem probíhá nezačalo

16 rodin 100 normálních kontrol provedena základní vyšetření odeslána plasma ke specialisovaným testům odeslána DNA ke genotypové analyse probíhá analysa genu u 16 rodin SOUČASNÝ STAV

ROZVRŽENÍ STUDIE Nábor rodin a kontrol Základní testy Konfirmační testy Specialisované testy Vazebné rodinné studie Haplotypová analysa Detekce mutací AB0 genotyp Exprese kandidátních mutací DDAVP Analysa dat Zavěrečná zpráva WP1 WP2 WP3 WP4 WP5 WP6 WP7 WP8 WP9 WP10 WP11 WP rodin, 1200 kontrol FVIII:C, vWF:Ag, vWF:RiCo, multimery, RIPA, PFA, isolace DNA vWF:FVIIIB, trombocytární vWF STR nukleotidové a aminokyselinové polymorfismy CSGE, HPLC, přímá sekvenace vztah mezi krvácením, laboratoním nálezem a molekulárním defektem

VÝSKYT PATOLOGICKÝCH NÁLEZŮ V 16 RODINÁCH nález patologický normální celkem muži ženy celkem DJKBVWEKRBVKBWERKBVRWHJKVHJEFVJQWV krvácivé projevy epistaxe modřiny poranění dutina ústní GIT extrakce po operacích po porodech svaly klouby menorhagie jiné nemocní zdraví

PODĚKOVÁNÍ Alena Janoušková Hana Novotná Jana Prellová Magda Zemanová Ivana Železná Ingrid Hrachovinová Milada Matýšková Peter Salaj Petr Turek Anne Goodeve IGA MZ ČR