Nezávislá externí kontrola virových markerů a infekčních onemocnění Zbyněk Valach ASCO-MED dobrý den rád bych přednesl krátký příspěvek o významu a používání kontrol kvality diagnostických testů

Kontrolou virových markerů a infekčních onemocnění … …myslíme používání připravených vzorků (kontroly) místo vzorků pacienta. Tyto kontroly mají „předem známé“ výsledky.

Proč kontroly kvality ? omezení chybných výsledků, ať už pozitivních nebo negativních zjištění chyb nedetekovaných validačními kritérii kitu pomoc při nejasných výsledcích pacientů identifikace trendů dříve, než se stanou problémem předcházení „nežádoucím událostem“ v rámci akreditací umožnění implementace nápravných opatření umožnění dokumentace validity testů pomoc při dosahování požadavků regulátorů a redukce nákladů (a času)

Proč kontroly kvality nevyrábět „doma“ práce s infekčním materiálem standardizace materiálu (vzorků) výběr dárců (jejich dostatek a „kvalita“) testování výsledné kontroly

Proč kontroly kvality práce laboratoře? Proč kontroly nevyrábět „doma“ ? externí kontroly kvality

Externí hodnocení kvality (EHK) Co rozumíme „externí nezávislou kontrolou“ ? používané termíny: Externí hodnocení kvality (EHK) Kontrola - pozitivní / negativní součástí diagnostické soupravy co rozumíme externí kontrolou kvality ? v souvislosti s kvalitou setů nebo kvalitou práce laboratoře se používají termíny Kontrola vyrobená nezávislým výrobcem

Externí hodnocení kvality (EHK) Vzorky rozesílané referenční laboratoří pro kontrolu korektní diagnostiky vzorků Slouží k vnější kontrole práce laboratoře Výsledky mohou ovlivnit hodnocení laboratoře v rámci více laboratoří

Pozitivní / negativní kontrola … (vnitřní) ... je součástí komerčních kitů, které dodává výrobce jako součást kitu pro kontrolu v rámci šarže. Jedná se o pozitivní a negativní kontrolu. negativní i pozitivní kontrola jsou ve skutečnosti kalibrátorem testu pro nastavení mezních hodnot co znamená, že je „velmi reaktivní“? negativní kontrola slouží pro výpočet cut-off

Kontrola vyrobená nezávislým výrobcem = Externí nezávislá kontrola pro vlastní (vnitřní) denní průběžnou kontrolu práce laboratoře výsledky jsou určeny pouze pro vlastní potřebu laboratoře kontrola práce laboratoře i kontrola „výkonnosti“ diagnostické soupravy … tedy i (možný) doklad pro akreditace

Příklad odůvodněnosti použití externích kontrol Použití externí kontroly kvality (EQC) pro monitorování výstupů plně automatizované HIV-1 RNA Real-Time PCR metody Peter Marchese(1), Heather Buckley(1), Mason Unger(2), Catherine Huang(2) and Bharathi Anekella(2) (1)SeraCare Life Sciences, Milford, MA; (2)SeraCare Life Sciences, Gaithersburg, MD sledování po dobu 17 měsíců (květen 2009 – září 2010) externí kontrola kvality (ACCURUN® 315 HIV-1 Positive Quality Control, SeraCare) byla použita současně s málo pozitivní kontrolou dodávanou výrobcem PCR kitu. počet měření hodnot Accurun315 n=58

KLPC nevykazuje významné změny A315 = Accurun 315 = externí nezávislá kontrola KLPC= kit low positive control = pozitivní kontrola součástí kitu šarže kitu hodnoty mimo předpokládaný rozsah předpokládaný rozsah hodnot KLPC nevykazuje významné změny

… používání externích kontrol kvality se týká řady procesů v laboratoři: validace metod efektivní denní kontrola kvality kalibrace činidel kalibrace a údržba přístrojů dokumentace zlepšování procesů externí hodnocení trénink

Co kontrola kvality (QC) může a co nemůže: detekovat systematickou chybu (posun v průměrných hodnotách kontroly) detekovat náhodnou chybu (zvětšení směrodatné odchylky měření) pomoci porozumět testovací metodě QC nemůže: detekovat chybu v metodice zjistit, co přesně je špatně

Proč používat a vyhodnocovat nezávislé málo pozitivní kontroly? Hlavní důvody: málo pozitivní kontroly jsou pro detekování většiny chyb účinnější než velmi pozitivní kontroly lepší porozumění systému při dlouhodobém vyhodnocování v čase nezávislé kontroly umožňují monitorovat kity napříč šaržemi

Příklad detekce chyb pomocí pozitivních kontrol Dva testy (anti-HIV, HBsAg) byly provedeny normálně a se simulací chybných podmínek testu:* inkubační teplota nižší (40⁰C -> na teplotu místnosti RT) čas inkubace kratší (o 1/3, 1/2 nebo 2/3) menší objem vzorku (1/2) Anti-HIV: vnitřní kontrola kitu nedetekovala žádnou chybu málo pozitivní externí kontrola detekovala všechny chyby HBsAg: vnitřní kontrola kitu nedetekovala žádnou chybu málo pozitivní externí kontrola detekovala 3 ze 4 chybných podmínek *Poster presentation at AABB National Meeting, San Diego, CA, November 1994. See also Tech. Bulletin #6 in green book.

Externí nezávislé kontroly výrobce SeraCare (dříve Boston Biomedica) nejčastěji používané jsou kontroly ACCURUN 1 - multi-markerové - jedno-markerové - pozitivní - negativní pouze u některých onemocnění

Multi-markerové pozitivní kontroly 1/3 Kontroly zacílené na konkrétní platformu (přístroj/test) - jejich hodnoty vycházejí v rámci očekávaných hodnot diagnostických souprav. např. ACCURUN 1 Serie 2600 je určena pro Abbott AxSYM® neboť virové markery, které různí výrobci používají ve svých testech jsou obvykle rozdílné, mají rozdílné hodnoty ředění a tím i rozdílné hodnoty optické density. Není tedy dobré mít jednu sérii pro testy různých výrobců, neboť každý test má jinou citlivost na ředění. ACCURUN kontroly jsou kapalné, připravené k použití (z ředěného materiálu).  

Multi-markerové pozitivní kontroly 2/3 Nejsou dané hodnoty OD externích kontrol ACCURUN. Při prvním použití kontroly ACCURUN (nebo při použití nové šarže) by měla laboratoř stanovit vlastní přijatelné hodnoty pro každou analýzu. Každá laboratoř může mít nastaveny vlastní kritéria spolehlivosti výsledků – konkrétní výsledek kontroly ACCURUN může být v jedné laboratoři nevyhovující, zatímco jiná laboratoř jej akceptuje.

Způsob vyhodnocování externích kontrol 3/3 Levey-Jennings graf kritéria spolehlivosti s/co rozmezí + / - 2x SD - běh testu je v přijatelném rozmezí, bez chyb 2x SD až 3x SD - upozornění na možné problémy v provedení testu více než 3x SD od průměru - před schválením výsledků je třeba provést pečlivou kontrolu provedení testu Směrodatná odchylka (SD) popisuje, do jaké míry jsou jednotlivé hodnoty rozptýleny od průměrné hodnoty. 19

Mezilaboratorní srovnání Accurun 1 serie 2700 šarže 117814 data celkem shodná metoda shodný reagent shodný výrobce shodný přístroj

Akceptovatelný rozsah hodnot při výrobě Accurun 1, serie 2700 pouze informativní hodnoty

SeraCare může nabídnout i … … Seroconversion Panel = neředěné vzorky sebrané od jednoho dárce během rozvoje inkekčního onemocnění a následné imunitní odpovědi … Performance Panel = neředěné vzorky sebrané od více dárců různé koncentrace analytu, různého genotypu a etnické / demografické příslušnosti. … Qualification Panel = obsahuje jeden negativní a pět ředěných positivních členů, které pokrývají dynamický rozsah většiny testovaných metod … Sensitivity and Linearity Panel = různě ředěné vzorky navržené pro testování sensitivity a linearity

Děkuji za pozornost www.ascomed.cz www.seracare.com