confocal laser scanning microscope (CLSM)

Slides:



Advertisements
Podobné prezentace
Odraz světla na rozhraní dvou optických prostředí
Advertisements

Vysoké učení technické v Brně AFM MIKROSKOPIE 2010 Laboratoře – Ústav fyziky – Fakulta stavební.
Čočky (Učebnice strana 110 – 114)
Přednáška 2 Analytické metody používané v nanotechnologiích
Speciální světelná, fluorescenční a konfokální mikroskopie
Vysoké učení technické v Brně
Systémy tisku CTP a CTF semestrální práce
Ramanova spektrometrie
Optické metody Metody využívající lom světla (refraktometrie)
Průtoková cytometrie.
Detekce proteinů na preparátech Histochemie. Metody detekce – vazba cílového proteinu Imunologické; primární protilátky sekundární protilátky Imunologické;
Scanning Electron Microscope
Imunologické laboratorní metody
Světelné jevy Optika II..
Interference světla za soustavy štěrbin Ohyb na štěrbině
Světlo se po dopadu na jiné optické prostředí
Optické odečítací pomůcky, měrení délek
Mikroskopy.
Optické přístroje (Fotoaparát – Mikroskop – Lupa)
OPTICKÁ EMISNÍ SPEKTROSKOPIE
Skener.
Rentgen Ota Švimberský.
Úvod do používání digitálního fotoaparátu
Digitální projektory. LCD (Liquid Crystal Display) DLP (Digital Light Processing)
Pasivní (parametrické) snímače
Digitální fotoaparáty
Využití difrakce v praxi
Technika a technické vzdělávání Dalibor Valenta
Optická mikroskopie Marek Vodrážka.
FYZIKA PRO IV. ROČNÍK GYMNÁZIA - OPTIKA
Odraz světla.
Radiační příprava práškových scintilátorů
Optické difúzní vnitřní bezdrátové komunikace: distribuce optického signálu Ing. David Dubčák VŠB-Technická univerzita Ostrava Katedra elektroniky a telekomunikační.
Film Klára Čermáková 4.C.
Perspektiva Perspektiva je optický jev, jenž způsobuje: Perspektiva je optický jev, jenž způsobuje: – že se vzdálené objekty jeví zdánlivě menší než objekty.
Orbis pictus 21. století Tato prezentace byla vytvořena v rámci projektu.
IMUNOFLUORESCENCE MUDr. Zita Trávníčková
Orbis pictus 21. století Tato prezentace byla vytvořena v rámci projektu.
Orbis pictus 21. století Tato prezentace byla vytvořena v rámci projektu.
Zoologická mikrotechnika - FLUORESCENČNÍ MIKROSKOPIE
Optické metody (pokračování) – fluorescence, fluorimetrie
FLUORESCENČNÍ MIKROSKOPIE
Přednášky z lékařské přístrojové techniky Masarykova univerzita v Brně
confocal laser scanning microscope (CLSM)
10. Koherence Časová koherence
Zelené fluorescenční světlo odhaluje ionty uranu
Stanovení délky a útlumu optického vlákna metodou optické reflektometrie – v Praze M. Heller, V. Míč.
Významný vynález Vypracoval:Lukáš Běhal.
V praktiku budou řešeny dvě úlohy:
Fluorescenční mikroskopie & její využití ve forenzní vědě EVROPSKÝ SOCIÁLNÍ FOND PRAHA & EU INVESTUJEME DO VAŠÍ BUDOUCNOSTI Podpořeno CZ.2.17/3.1.00/36021.
Mikroskopy Světelný Konfokální Fluorescenční Elektronový.
Geometrická optika. Geometrická optika je částí optiky, která se zabývá studiem šíření světla v prostředí, jehož rozměry jsou velké ve srovnání s vlnovou.
Fotoaparát.
Přenos dat infračerveným zářením OB21-OP-EL-ELN-NEL-M
Vysoké učení technické v Brně MIKROSKOPIE KONFOKÁLNÍ A AFM 2013 Laboratoře – Ústav fyziky – Fakulta stavební.
OPTICKÉ PŘÍSTROJE Lupa slouží k pozorování malých blízkých předmětů spojná čočka s ohniskovou vzdáleností do 25 cm zvětšuje 10x předmět.
délka 1,2 m Johann a Zacharias Jansenové (16. stol.) Systém dvou čoček Typy světelných mikroskopů.
Vysoké učení technické v Brně
Periferní zařízení počítače - opakování
Tato prezentace byla vytvořena
Světlo, optické zobrazení - opakování
Optické přístroje VY_32_INOVACE_59_Optické přístroje
Financováno z ESF a státního rozpočtu ČR.
Číslo projektu: CZ.1.07/1.4.00/ Název DUM: Vlastnosti světla
Laserové skenování 3D záznam tvarů objektů dopadem laserového paprsku na předmět a detekce odraženého záření – intenzita a směr, složení obrazu z velkého.
Digitální učební materiál
Chemiluminiscence, fluorescence
IMUNOFLUORESCENCE MUDr. Zita Trávníčková
Prof. MUDr. Mojmír Petraň
Vysoké učení technické v Brně
Transkript prezentace:

confocal laser scanning microscope (CLSM) Konfokální mikroskop confocal laser scanning microscope (CLSM)

Historie Minský M. (60. léta 20. století) Petráň M. a Hadravský M. (1967) - konstrukce konfokálního mikroskopu pracujícího na bázi rotace Nipkowova kotouče rozvoj od konce 70. let 20. století - laserový paprsek, počítač dvou (multi-) fotonový mikroskop

Confocal - conjugate (sbíhat) + focal (ohniskový) Laser obě clonky jsou umístěny v ohniscích Laser Scanning Microscop (internet)

zrcadlová bodová clonka zaostřená rovina zrcadlová bodová clonka laser dělič paprsků a rastrovací zařízení informace o souřadnicích bodů (X - Y) konfokální bodová clonka detektor světla informace o intenzitě světla objektiv objekt Schéma současného konfokálního mikroskopu (s rozmítaným laserovým paprskem) (Vesmír, 1995)

Princip konfokálního mikroskopu konfokální clonka paprsky z ohniskové roviny ohnisková rovina paprsky z mimoohniskových rovin čočka mimoohniskové roviny

Konfokální mikroskop na bázi Nipkowova kotouče světlo série čoček dichroické zrcátko CCD Nipkowovy kotouče série otvorů rotace objektiv objekt (internet)

1 2 3 4 řez 3 řez 4 řez 2 řez 1

řez 4 řez 3 řez 1 řez 2

Využití světla pro CLSM reflexe - textura a složení povrchů - elektronických součástek, studium neuronových sítí (pomocí Ag), … difúze fluorescence - struktura buňky a tkání, studium metabolických drah, ...

Výhody CLSM odstranění mimoohniskových rovin vysoký kontrast obrazu neinvazní metoda zachování prostorového uspořádání schopnost vytvoření prostorové rekonstrukce digitální forma výstupu - rotace, perspektiva, ... schopnost zobrazení buňky - tkáně - mnohobuněčného organismu současné použití až 4 kanálů + procházející světlo

Nevýhody CLSM délka zpracování materiálu i snímků =>,,vyhasínání fluorescence” neostré snímky při nízké intenzitě fluorescence pořizovací cena (mikroskop, konfokální nástavec, počítač + program)

snímek z digitálního fotoaparátu snímek z konfokálního mikroskopu

Srovnání 3 metod užívaných ve fluorescenční mikroskopii rtuťová výbojka laser laser optický řez (0,5-2µm) fluorescenční konfokální 2-fotonová excitační světlo oblast excitace ( „vyhasínání“) pozorovaná oblast (Lacey, 1999)

(Olympus)

Dvoufotonová mikroskopie absorbce 2 fotonů fluorochromem ve stejném okamžiku => záření s dvojnásobnou vlnovou délkou (poloviční energie) => excitační záření 700 nm (červená) => emitované záření 900 nm

Výhody se zvyšující se intenzitou záření zdroje se zvyšuje pravděpodobnost absorpce 2 fotonů fluorochromem excitace fluorochromu jen v zaostřené rovině => odpadá nutnost konfokální clonky => maximum světla velká vlnová délka (700 nm) => pomalejší „vyhasínání“ menší rozptyl světla ve vzorku větší penetrace světla ve vzorku malá fototoxicita (x UV záření) Nevýhody cena Ti Sapphire laseru ohřev vzorku => užití laserových pulsů než plynulé ozáření

Srovnání konfokální a 2-fotonové mikroskopie (internet) oblast excitace pozorovaná oblast

Konfokální mikroskopy LSM 5 LIVE FV 500 TCS SP2 DIGITAL ECLIPSE C1

Olympus Fluoview 500 optické řezy v rovinách XY, XYZ , XZY schopnost zaznamenat změny i v časové rovině XYt, XYZt současné snímání obrazu v procházejícím a fluorescenčním světle použití 4 kanálů zároveň sekvenční snímání volitelnost rychlosti a typu rastrování => kvalita snímku kompenzace šumu, zesíleni signálu 3D rekonstrukce obrazu a rotace

FITC fluorochrom TRITC faloidin + FITC fluorochrom TRITC F-aktin

vazba aktin-faloidin (FITC)

vazba aktin-faloidin (FITC)

vazba aktin-faloidin (TRITC)

vazba tubulin-protilátka (FITC)

vazba aktin-faloidin (FITC) vazba DNA-DAPI

vazba aktin-faloidin (FITC) vazba DNA-DAPI vazba mitochondrie-mitotracker red neuron, vazba mikrotubulové proteiny- protilátka (Texas-RED)

autofluorescence

Internetové odkazy http://137.120.28.214/cslm/lpath.mpg http://www.microscopyu.com/articles/confocal/index.html http://www.olympusmicro.com/primer/virtual/confocal/index.html http://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/multiphoton/excitationbleaching/index.html http://www.olympusmicro.com/primer/java/confocal/index.html http://www.microscopyu.com/galleries/confocal/index.html http://www.lob.polytechnique.fr/themes/imagerie_fonctionnelle/Anim_cell1_small.gif