FAGOCYTÓZA.

Slides:



Advertisements
Podobné prezentace
 M ETODY F AGOCYTÓZY - vyšetření zahrnuje:  krevní diferenciál - % zastoupení LEU  izolace LEU  stanovení funkce LEU 4 skupiny testů na fagocytózu:
Advertisements

Metody Fagocytózy   - vyšetření zahrnuje:  krevní diferenciál - % zastoupení LEU  izolace LEU  stanovení funkce LEU   4 skupiny testů na fagocytózu:
Fagocytóza = základní nástroj nespecifické imunity (společně s komplementem) fagocytující buňky proces fagocytózy.
FAGOCYTÓZA.
VY_32_INOVACE_Slo_I_07 Vzduch, kyslík ppt. Název projektu: OP VK Registrační číslo: CZ.1.07/1.4.00/ OP Vzdělání pro konkurenceschopnost.
Fotosyntéza. Co to je? o Z řeckého fótos – „světlo“ a synthesis –„skládání“ o Biochemický proces, probíhá v chloroplastech (chlorofyl) o Mění přijatou.
Ch_056_Buněčné dýchání Ch_056_Přírodní látky_Buněčné dýchání Autor: Ing. Mariana Mrázková Škola: Základní škola Slušovice, okres Zlín, příspěvková organizace.
EU peníze středním školám Název vzdělávacího materiálu: Fotosyntéza – temnostní fáze Číslo vzdělávacího materiálu: ICT10/20 Šablona: III/2 Inovace a zkvalitnění.
Ch_055_Fotosyntéza v noci Ch_055_Přírodní látky_Fotosyntéza v noci Autor: Ing. Mariana Mrázková Škola: Základní škola Slušovice, okres Zlín, příspěvková.
Fotosyntéza. Fotosyntéza je složitý proces probíhající v několika stupních v zelených částech rostlin. Účinkem světla za přítomnosti zeleného barviva.
NÁZEV ŠKOLY: Základní škola, Uherský Ostroh, okres Uherské Hradiště, příspěvková organizace AUTOR: Mgr. Blanka Hipčová NÁZEV: VY_52_INOVACE_02_CH+PŘ_10.
ZÁKLADNÍ PROJEVY ŽIVÝCH ORGANISMŮ Zpracovala : Mgr. Jana Richterová ICT Financováno z prostředků ESF a státního rozpočtu ČR 1 Přírodopis 6. třída.
P ŘÍPRAVA POKRMŮ Hlavní živiny Vypracoval: Lukáš Karlík.
Základní mikrobiologický rozbor vody
Termika – Fotovoltaika
Výživa a hygiena potravin
Číslo projektu CZ.1.07/1.5.00/ Číslo materiálu
Vzdělávání pro konkurenceschopnost
OSMOTICKÁ FRAGILITA ERYTROCYTŮ.
IMUNITA VY_32_INOVACE_ září 2013
Číslo projektu CZ.1.07/1.4.00/ Název sady materiálů Občanská výchova
ZÁKLADNÍ ŠKOLA SADSKÁ Název školy: Autor: Mgr. Jiří Hajn Název DUM:
FAGOCYTÓZA II Mgr. Olga Tichá, LF MU.
FAGOCYTÓZA Mgr. Olga Tichá, LF MU.
Výukový materiál zpracován v rámci projektu
Číslo projektu: CZ.1.07/1.5.00/ Číslo materiálu: VY_32_INOVACE_567_ Výroba sýrů a jogurtů 1 Název školy: Masarykova střední škola zemědělská a Vyšší.
Autor: PaedDr. Hana Hrubcová Název:VY_32_INOVACE_3B_13_Krev Téma: Krev
Krev - opakování.
„Svět se skládá z atomů“
CHEMIE - Metabolismus Název školy SŠHS Kroměříž Číslo projektu
Tělní tekutiny krev.
CHEMILUMINISCENČNÍ TEST
Číslo projektu CZ.1.07/1.5.00/ Číslo materiálu
Metabolické děje I. – buněčné dýchání
Tento materiál byl vytvořen rámci projektu EU peníze školám
NÁZEV ŠKOLY: ZŠ J. E. Purkyně Libochovice
Ústav klinické imunologie a alergologie
VODÍK Tato práce je šířena pod licencí CC BY-SA 3.0. Odkazy a citace jsou platné k datu vytvoření této práce. VY_32_INOVACE_17_26.
Vyšetřování parametrů humorální imunity
Ústav klinické imunologie a alergologie
Základní škola a Mateřská škola Bílá Třemešná, okres Trutnov
Počítání krevních buňek
NÁZEV ŠKOLY: ZŠ J. E. Purkyně Libochovice
C1200 Úvod do studia biochemie 2.1 Biochemická diagnostika
Fotosyntéza.
2. Základní chemické pojmy Obecná a anorganická chemie
Autor : Mgr. Terezie Nohýnková
Náplň seminářů III. ročník všeobecné lékařství
Polymerase chain reaction Polymerázová řetězová rekce
Mikrobiologický ústav LF MU a FN u sv. Anny v Brně
Kultivace hematopoetických buňek
Kontrola prostředí a sterility
9. ABIOTICKÉ PODMÍNKY ŽIVOTA
Laboratorní diagnostika
Vyšetření parametrů buněčné imunity
Genetické patologické stavy
Tvoří pedosféru, studuje ji pedologie
Výstupy školního vzdělávacího programu Škola neomezených možností
C3181 Biochemie I 12-Fotosyntéza FRVŠ 1647/2012 Petr Zbořil 12/30/2018.
Úvod do imunologie Martin Liška.
Kultury rostlin in vitro
IMUNOESEJE.
Zánět
Metody Fagocytózy   - vyšetření zahrnuje:  krevní diferenciál - % zastoupení LEU  izolace LEU  stanovení funkce LEU   4 skupiny testů na fagocytózu:
Neživá příroda - vzduch

Název projektu: ZŠ Háj ve Slezsku – Modernizujeme školu
Kyslík - Oxygenium PSP IV.A skupina  6 valenčních elektronů
Získávání energie pro život
12. Skleníkový jev, ozónová vrstva
Transkript prezentace:

FAGOCYTÓZA

Fagocytóza je proces pohlcení a degradace částic větších než 0,5 µm. → pohlceným materiálem mohou být cizorodé bakterie, poškozené, odumřelé buňky či jejich části, minerální částečky, atd.

FAGOCYTUJÍCÍ BUŇKY neutrofil eosinofil basofil monocyt makrofág            eosinofil basofil monocyt makrofág dendritická b. FAGOCYTUJÍCÍ BUŇKY V periferii je cca 7% celkového množství fagocytů, zbytek je v kostní dřeni, odkud se průběžně vyplavují a zároveň doplňují.

KREVNÍ DIFERENCIÁL využití průtokové cytometrie s mAb nebo bez nich granulocyty tvoří 40-65% všech leukocytů parfirení krve GADJ=lymfocyty

PRŮBĚH FAGOCYTÓZY ADHEZE („rolling“) → cytometrie – defektní exprese leukocytárních integrinů - Leukocyte Adhesion Deficiency Syndromes (LAD1, LAD2) DIAPEDÉZA = průchod leukocytů cévní stěnou ROZPOZNÁNÍ OPONIZOVANÝCH ČÁSTIC CHEMOTAXE → test migrace pod agarózou - ve směru chemotaktického gradientu (chemotaktické faktory, např. IL-8, směřují fagocyty do místa zánětu) INGESCE → fagocytóza mikroorganismů nebo inertních částic DIGESCE - mechanismus nezávislý na kyslíku → mikrobicidní test, detekce enzymů - mechanismus závislý na kyslíku → mikrobicidní test, NBT, INT, detekce myeloperoxidázy, chemiluminiscenční test, „burst“ test

ROZPOZNÁVACÍ MECHANISMY FAGOCYTŮ Fagocyty jsou schopné rozpoznat struktury, které se nacházejí na povrchu mikroorganizmů, ale ne na buňkách vlastních. Tyto struktury jsou evolučně konzervované, sdílené různými mikroorganismy a nezbytné pro jejich život. Příklady: LPS (G-bakterie), peptidoglykany (G+ bakterie), glukany a manany (kvasinky a plísně) Opsoniny – komplementové fragmenty (C3b), protilátky (Fc fragment IgG) Fosfolipidy - na povrchu vlastních apoptotických buněk (za normálních okolností se nacházejí výhradně na vnitřní straně membrány)

PRO ROZPOZNÁNÍ RŮZNÉ DRUHY RECEPTORŮ Pro rozpoznání charakteristických mikrobiálních nebo apoptotických komponent slouží fagocytům různé druhy receptorů: manózové receptory rozeznávající cukerné struktury na povrchu bakterií a některých virů scavengerové receptory – rozeznávají acetylované LDL chemotaktické receptory (fMLP) Toll-like receptory komplementové receptory Fc receptory

RESPIRAČNÍ VZPLANUTÍ Stimulace povrchové membrány fagocytů – aktivace NADPH oxidázy – zvýšená spotřeba kyslíku a jeho přeměna na reaktivní kyslíkové deriváty O2- … superoxidový anion H2O2 … peroxid vodíku 1O2 … singletový kyslík HOCl ... kyselina chlorná OH. ... hydroxylový radikál

Glu-6-P HCO3- HMP zkrat NADP + 2H+ NADPH + H+ NADPH oxidáza O2 O2- + O2- + 2H+ Fe3+ /Fe2+ superoxiddismutáza OH. H2O2 (Haber-Weiss) myeloperoxidáza +SCN- +Cl- +RH HOCl HOSCN + H2O2 + O2- R. + R-NH2 1O2 R-NHCl OH.

KLINICKÝ VÝZNAM FAGOCYTÓZY Správná funkce fagocytů je pro organismus nezbytná!!! (hlídání adekvátnost zánětlivé reakce na cizorodou částici: cizorodá vs. vlastní) Naopak hyperaktivace fagocytů – problémy: poškození okolních buněk a tkání reaktivními metabolity a proteolytickými enzymy Deficience ve funkcích fagocytů = těžký průběh banálních infekcí příklad: CGD (chronická granulomatóza) – defektní NADPH oxidáza (častá bakteriální a fungální onemocnění)

Burst test Kvantitativní test pro vyhodnocení oxidačního vzplanutí u granulocytů a monocytů Fagocytující buňky se stimulují E. coli, fMLP a PMA (3 různé zkumavky)-dochází k oxidačnímu vzplanutí Ke vzorkům přidán DHR (dihydrorhodamin 123), který je kyslíkovými radikály oxidován na zeleně fluoreskující rhodamin 123 Na průt. cytometru sledován počet (procento) zeleně fluoreskujících granulocytů a monocytů

CHRONICKÁ GRANULOMATÓZA BEZ STIMULACE STIMULACE PMA ZDRAVÁ KONTROLA STIMULACE PMA 97% PACIENT STIMULACE PMA: 12%

STIMULACE E.Coli ZDRAVÁ KONTROLA PACIENT S CGD

CHRONICKÁ GRANULOMATÓZA (AUTOZOMÁLNĚ RECESIVNÍ)

CHRONICKÁ GRANULOMATÓZA (X-VÁZANÁ)

DALŠÍ VYŠETŘENÍ FAGOCYTÓZY MIKROBICIDNÍ TEST zahrnuje všechny fáze fagocytárního děje sledování schopnosti fagocytů pohlcovat a usmrcovat živé kvasinky (C. albicans); usmrcené kvasinky se z fagocytů uvolní deoxycholátem a jejich množství se určí obarvením methylenovou modří (modré=usmrcené, bílé=živé) NBT (INT) TEST poruchy v NADPH-oxidázovém systému při aktivaci fag. vznikají kyslíkové deriváty (peroxid vodíku, superoxidový radikál) – tato aktivita je hodnocena redukcí tetrazoliových solí; bezbarvý roztok soli proniká při fagocytóze do buňky, kde je redukován na nerozpustný barevný formazan; při extrakci měřitelný spektrofotometricky. NBT = nitrobluetetrazolium INT = iodonitrotetrazolium

TEST CHEMILUMINISCENCE Chemiluminiscence je jev, kdy dochází v důsledku chemické reakce k emisi světla Při procesech redukce molekulárního kyslíku vznikají elektronově excitované stavy, které emitují fotony (světlo). Kvantitativní sledování oxidačního vzplanutí fagocytů Fagocytující buňky plná krev izolované polymorfonukleární buňky Luminofory luminol (5-amino-2,3-dihydro-1,4-phtalazinedione) lucigenin (bis-N-methylacridinium nitrát) Stimulátory korpuskulární: škrob, opsonizovaný zymozan solubilní: phorbol myristát acetát (PMA) Aktivita spontánní stimulovaná

DETEKCE KYSLÍKOVÝCH DERIVÁTŮ VZNIKLÝCH V PROCESU RESPIRAČNÍHO VZPLANUTÍ Zesílení přirozené chemiluminiscenční aktivity fagocytů přídavkem luminoforu. energie chemické reakce LUMINOFOR LUMINOFOR* energeticky bohatší, nestabilní Uvolnění přebytečné energie ve formě světelných kvant registrovatelných fotonásobičem luminometru.

PRACOVNÍ POSTUP Odběr venózní krve do heparinu (5j heparinu/1ml krve). Krev 30 min inkubovat v termostatu při 37°C. Materiál zpracovat do 120 min po odběru. Krev vyšetřit hematologicky (celkový počet leukocytů, KO). U každého pacienta vyšetřit: spontánní aktivitu (bez stimulace) i stimulovanou aktivitu (stimulace 1% rýžovým škrobem). Pipetovací schéma:  AKTIVITA řádky MEM luminol škrob krev SPONTÁNNÍ B,C,D 85 µl 10 µl x STIMULOVANÁ E,F,G 75 µl

Výpočet indexu metabolického vzplanutí (IMV). Měření chemiluminiscence luminometrem ve 3 minutových intervalech po dobu 45 min při teplotě 37oC. Hodnocení výpočtem integrované plochy pro spontánní i stimulovanou aktivitu a její přepočet na 105 fagocytujících buněk. Výpočet indexu metabolického vzplanutí (IMV). Klinický význam vyšetření: - diagnostika chronické granulomatózy (defekt NADPH oxidázy ) - defekt myeloperoxidázy (srovnání chemiluminiscence lucigenin-luminol) - vliv léčiv na fagocytózu - septické stavy

KINETIKA RESPIRAČNÍHO VZPLANUTÍ Vmax … maximální produkce fotonů (vrchol odpovědi) tmax … čas nutný k dosažení maximální produkce fotonů Hodnota integrované plochy pod křivkou … vyjádření celkového množství fotonů vyprodukovaných systémem za definovaných podmínek Vmax tmax