Základy vícebarevné cytometrie v diagnostice 2015 Standardizace měření v průtokové cytometrii Martin Špryngar Exbio Praha a. s.

Prezentace na téma: "Základy vícebarevné cytometrie v diagnostice 2015 Standardizace měření v průtokové cytometrii Martin Špryngar Exbio Praha a. s."— Transkript prezentace:

1 Základy vícebarevné cytometrie v diagnostice 2015 Standardizace měření v průtokové cytometrii Martin Špryngar Exbio Praha a. s.

2 Zpracování vzorku Měření vzorku Analýza dat Interpretace dat Standardizace v průtokové cytometrii Vzorek Závěr

3 Standardizace měření = porovnatelná data v dlouhodobém horizontu naměřená na jednom cytometru naměřená na různých cytometrech naměřená na různých cytometrech v různých laboratořích Visací Zámek 1982 – 2007, Jan Houbert: „Jsme tenkrát nevěděli, že kytary se mají ladit...někdo nám pak řekl, že se mají ladit, ale to jsme zase netušili, že i nějak jako vzájemně. Takže všechny ty písničky byly takový originály.“

4 Nástroje standardizace měření na průtokovém cytometru 1. Definice cílových hodnot fluorescence standard 2. Udržení cílových hodnot fluorescence změnou PMTV

5 Postup standardizace měření pro daný experiment Charakterizace cytometru Optimalizace na měřený vzorek Změření a zaznamenání cílových hodnot fluorescence Převedení PMTV do instrument settings – dále application setting Změření kompenzačních kontrol Akvizice experimentu

6 Definice Cílových hodnot MFI 35895 32941

7 Udržení cílových hodnot MFI Den xDen 1Den 2 396 V403V 564 V 554V 403V

8 Udržení cílových hodnot MFI Zajištění reprodukovatelnosti měřených dat změnou PMTV 1) Automaticky - Platformy výrobců (CS&T, FlowCheck+FlowSet) 2) Manuálně – „monitoring“ (EuroFlow) Data změřená dnes stejně jako za týden, měsíc, rok… = porovnatelná data v dlouhodobém horizontu

9 Platforma Beckman Coulter

10 Platforma BD Biosciences Cytometer Set-up & Tracking (CS&T) System

11 CS&T modul v Diva + Application Settings Baseline = charakterizace cytometru Performance Check = Denní kontrola kvality = ∆PMTV nutná k zachování Cílových MFI Application settings = Standardizace konkrétní aplikace = set hodnot PMTV (Instrument settings), při kterých jsou dosaženy požadované fluorescence, = modifikace pro danou aplikaci

12 CS&T modul: Baseline a linearita měření

13 Baseline - zobrazení jako funkce PMTV

14 CS&T modul: Baseline = min PMTV pro optimální rozlišení signálu od šumu Baseline definuje okno pro optimalizaci PMTV pro konkrétní aplikaci (setup)

15 CS&T modul: Baseline = min PMTV pro optimální rozlišení signálu od šumu Baseline definuje okno pro optimalizaci PMTV pro konkrétní aplikaci (setup)

16 Linearita - zobrazení jako funkce PMTV

17 Stand. měření mezi cytometry/mezi laboratořemi 1.Definice cílových hodnot MFI 2.Udržení cílových hodnot MFI NAVIOSCANTO + NAVIOS CD3 FITC CD4 PE CANTO

18

19 Výkon laseru a linearita měření Medián bright bead populace byl umístěn do stejného FL kanálu = Cílová hodnota MFI

20 Děkuji za pozornost