Analýza dat při vývoji diagnostiky azbestózy a silikózy Jitka Housková Studijní obor: Syntéza a výroba léčiv Vedoucí práce: Ing. P. Kačer, Ph.D.

2 / 9 Oxidační stres a 8-isoprostan:Oxidační stres a 8-isoprostan: –oxidační stres je způsobený tzv. ROS (reactive oxygen species): hydroxyl, hydroperoxyl, alkoxyl a peroxyl radikály, superoxidovým anion radikálem –ROS reagují s kyselinou arachidonovou za vzniku isoprostanů, dále způsobují oxidaci a destrukci nukleových kyselin, aminokyselin a lipidů –snaha využít měření 8-isoprostanu (a to nejen z KVV) k diagnostice některých nemocí: silikóza, azbestóza, astma, cukrovka, Alzheimerova choroba, Parkinsonova choroba; také posouzení účinnosti antioxidační terapie Úvod

Zdroje volných radikálů 3 / 9 - oxidační stres: mitochondrie, životní prostředí, léčiva, zánětlivé procesy, kuřáci x nekuřáci, životní styl - eliminace ROS: antioxidační systémy (SOD, CAT, GSH px ),  -karoten, vit E, C

Oxidace katalyzovaná ROS - vznik 4 tříd konstitučních isomerů, v každé třídě 2 4 optických isomerů - 5 chirálních uhlíků 4 / 9

Biologické účinky:Biologické účinky: –konstrikce: průdušek, plicní tepny, glomerulární tepny –vratné shlukování krevních destiček a změna jejich tvaru Marker oxidačního stresu:Marker oxidačního stresu: –zvýšené hladiny při onemocnění Biosyntéza:Biosyntéza: 5 / 9 8-isoprostan

Analýza dat Analýza vzorků KVV:Analýza vzorků KVV: –odběr: kondenzátorem vydechovaného vzduchu, přídavek tetradeuterovaného standardu, zmrazení na (-80°C) –přečištění a zakoncentrování: imunoextrakce –analýza: HPLC-MS Dvě skupiny dobrovolníků:Dvě skupiny dobrovolníků: –muži, nekuřáci, pacienti: 71 let, kontrolní skupina: 66 let –pacienti dlouhodobě vystaveni azbestu nebo křemičitému prachu –odběr KVV mezi 8 a 12 hodinou –vyhodnoceno 97 vzorků od pacientů a 101 od kontrolní skupiny 6 / 9

7 / 9 Analýza dat Kalibrace:Kalibrace: Přesnost:Přesnost: R (max-min), s x, RSD (%) Opakovatelnost:Opakovatelnost: s x. 2,8 = 10,5 pg ml -1 ; vyhovuje Výtěžnost (recovery):Výtěžnost (recovery): 83% - 109% (měřeno v rozsahu 25 až 250 pg ml -1 ) - koncentrace ve vzorcích: x vz = (y vz - B) / A - interval spolehlivosti:

8 / 9 Analýza dat Krabicový diagram:Krabicový diagram: Medián (x 0,5 ) Mezikvartil. rozpětí = x 0,75 - x 0,25 Kontrolní skupina: (42 ± 4) pg ml -1 x 0,5 = 44 pg ml -1 R q = 22 pg ml -1 Pacienti: (98 ± 6) pg ml -1 x 0,5 = 92 pg ml -1 R q = 32 pg ml -1

Závěr 8-isoprostan citlivý marker oxidačního stresu8-isoprostan citlivý marker oxidačního stresu pacienti s azbestózou nebo silikózou plicpacienti s azbestózou nebo silikózou plic –8-isoprostan vzniká důsledkem zánětu v plicích metoda odběr KVV, přečištění, kvantifikace HPLC-MS vyhovujícímetoda odběr KVV, přečištění, kvantifikace HPLC-MS vyhovující –výtěžnost: 83% - 109%, LOD = 0,4 pg ml -1, LOQ = 0,8 pg ml -1, přesnost, opakovatelnost 9 / 9