Sekvencování Sangerova metoda - dideoxyterminátory O PPP H OH H OH H H 5´ 3´ NTP N N N N NH 2 O PPP H H H OH H H 5´ 3´ dNTP N N N N NH 2 O PPP H H H H.

Slides:



Advertisements
Podobné prezentace
Imobilizace a stabilizace enzymů.
Advertisements

Chemické reakce Mgr. Helena Roubalová
Genetické polymorfismy v kriminalistické historii
Typy chemických reakcí
Užití fragmentové analýzy a multiplex PCR s vícebarevným fluorescenčním značením k detekci nejčastějších mutací u dědičných neuropatií (HMSN). P. Seeman,
STUDIUM CHOVÁNÍ ESTERŮ KYSELINY KŘEMIČITÉ V ZÁSADITÉM PROSTŘEDÍ
Polymerázová řetězová reakce
Klasifikace chemických reakcí
Real-time PCR - princip
CHEMICKÉ REAKCE.
PCR - polymerase chain reaction -polymerázová řetězová reakce
X. Chemická ROVNOVÁHA Pozor: tato kapitola se velmi plete s chemickou kinetikou (kapitola VIII) !! Pozn.: Jen stručně, podrobnosti jsou v učebnicích.
Biochemické metody separace proteinů
Polymorfizmy detekované speciálními metodami s vysokou rozlišovací schopností Stanovení jednonukleotidových polymorfizmů (Single Nucleotide Polymorphisms.
Chemická reakce a její rovnice
Molekulární genetika.
BÍLKOVINY.
Organické reakce Pro organické reakce platí stejné zákony jako pro anorganické reakce. Dělíme je na čtyři základní druhy: a - substituce b - adice c -
Zákon zachování hmotnosti Mgr. Helena Roubalová
Atomová hmotnostní jednotka mu (amu)
CHEMICKÉ REAKCE A ROVNICE
2. Regulátory Michal Ondráš ME 4C. Regulátory u soustav můžeme rozdělovat dle různých hledisek: 1. …………….. 2. ……………. 3. ……………. 4. ……………..
(genové mutace, otcovství, příbuznost orgánů při transplantacích) RNA
Radiační příprava práškových scintilátorů
Jakub Špork 20. prosince O co dnes půjde?  Zbytky včerejší večeře (4P)  Marketing.
Neutralizace.
ZÁKON ZACHOVÁNÍ HMOTNOSTI, CHEMICKÁ REAKCE
ZÁKLADNÍ ŠKOLA BENÁTKY NAD JIZEROU, PRAŽSKÁ 135 projekt v rámci operačního programu VZDĚLÁVÁNÍ PRO KONKURENCESCHOPNOST Šablona číslo: V/2 Název: Využívání.
ŠablonaIII/2číslo materiálu394 Jméno autoraMgr. Alena Krejčíková Třída/ ročník1. ročník Datum vytvoření
A opět názvosloví. Úkol 1: Rozděl sloučeniny na hydroxidy, kyseliny, soli: HClO 3, NaOH, NaClO 3, H 3 PO 4, HCl, CuCO 3, HIO 4, Ca(OH) 2, Fe(OH) 3, K.
Metoda SDA strand displacement amplification
Vývoj mikrosatelitních markerů (SSR) KBO/125 Jiří Košnar, katedra botaniky PřF JU, 2012 Kurz byl financován z projektu FRVŠ 1904/2012.
Analýza mutace C282Y v genu pro hemochromatózu
Kvantifikace nukleových kyselin
DNA diagnostika II..
Mária Ol’hová, Veronika Frkalová, Petra Feberová
Komplexní sloučeniny v roztoku
Vyšetřovací metody v molekulární biologii
Moderní metody buněčné biologie
Farmakogenetika Cíl Na základě interdisciplinárního integrace znalostí farmakologie a genetiky popsat vliv dědičnosti na odpověď organismu.
Sekvencování DNA stanovení pořadí nukleotidů v molekule DNA (primární struktury)
DNA diagnostika a principy základních metod molekulární biologie
Neutralizace Dostupné z Metodického portálu ISSN: , financovaného z ESF a státního rozpočtu ČR. Provozováno Výzkumným ústavem pedagogickým.
Párováni bazí, hybridizace a denaturace DNA/RNA hraje důležitou roli v přírodě i aplikacích: - struktura DNA a duplikace genetické informace - transkripce.
V praktiku budou řešeny dvě úlohy:
Ligázová řetězová reakce
Biotechnologie, technologie budoucnosti Aleš Eichmeier.
SEKVENOVÁNÍ DNA. Jedna z metod studia genů Využití v aplikovaných oblastech molekulární biologie – např. medicíně při diagnostice genetických chorob.
Genetika člověka – cytogenetické a molekulární metody Autor: Mgr. Jitka MaškováDatum: Gymnázium, Třeboň, Na Sadech 308.
PRŮKAZ NUKLEOVÉ KYSELINY Lékařská mikrobiologie – cvičení, jarní semestr 2016 Mikrobiologický ústav LF MU
Autorem materiálu a všech jeho částí, není-li uvedeno jinak, je Mgr. Alexandra Hoňková. Slezské gymnázium, Opava, příspěvková organizace. Vzdělávací materiál.
Předmět:chemie Ročník: 2. ročník učebních oborů Autor: Mgr. Martin Metelka Anotace:Materiál slouží k výkladu učiva o vodíku. Klíčová slova: vodík, výskyt,
Environmentální aplikace molekulární biologie
Sekvencování DNA stanovení pořadí nukleotidů v molekule DNA (primární struktury)
Manipulace s DNA Manipulace s proteiny Analýza genové exprese
Metodologie molekulární fylogeneze a taxonomie hmyzu
Bi5130 Základy práce s lidskou aDNA
NÁZEV ŠKOLY: ČÍSLO PROJEKTU: NÁZEV MATERIÁLU: TÉMA SADY: ROČNÍK:
NÁZEV ŠKOLY: ČÍSLO PROJEKTU: NÁZEV MATERIÁLU: TÉMA SADY: ROČNÍK:
Bi5130 Základy práce s lidskou aDNA
RT – PCR: návrh primerů.
Separace molekul nukleových kyselin centrifugací
Užití fragmentové analýzy a multiplex PCR s vícebarevným fluorescenčním značením k detekci nejčastějších mutací u dědičných neuropatií (HMSN). P. Seeman,
Sekvencování DNA.
Polymerase chain reaction Polymerázová řetězová rekce
CHEMICKÁ KINETIKA. chemické vazby vznikají a zanikají při chemických reakcích.
Dominika verešová Kateřina Sapáková
genetická informace jako „vstupenka“ do 21. století
18b-Metody studia nukleových kyselin
URČENÍ BAKTÉRIE RODU BORRELIA POMOCÍ DNA SEKVENACE
Transkript prezentace:

Sekvencování Sangerova metoda - dideoxyterminátory O PPP H OH H OH H H 5´ 3´ NTP N N N N NH 2 O PPP H H H OH H H 5´ 3´ dNTP N N N N NH 2 O PPP H H H H H H 5´ 3´ ddNTP N N N N NH 2

Dideoxyterminátory O PPP H H H H H H 5´ 3´ N N N N NH 2 FLU O PPP H H H H H H 5´ 3´ FLU O PPP H H H H H H 5´ 3´ FLU O PPP H H H H H H 5´ 3´ FLU N N N N O NH 2 N N O NH 2 N N O O CH 3

Průběh sekvencování 1. denaturace (92-96°C) 2. annealing (45-72°C) dsDNA 3. extenze (72°C)

Průběh sekvencování 1. denaturace (92-96°C) 2. annealing (45-72°C) dsDNA 3. extenze (72°C)

Průběh sekvencování 1. denaturace (92-96°C) 2. annealing (45-72°C) dsDNA 3. extenze (72°C)

Zařazování ddTTP ATGCTACGTTTAGCCACATTTGCCATATGAACCT TGCAAA O PPP H H H H H H 5´ 3´ FLU N N O O CH 3 TGCAAATCGGTGT TGCAAATCGGT TGCAAAT TGCAAATCGGTGTAAACGGT

Zařazování dalších ddNTP ATGCTACGTTTAGCCACATTTGCCATATGAACCT TGCAAA TGCAA TGCA TGCAAATCGGTGTA ATGCTACGTTTAGCCACATTTGCCATATGAACCT TGCAAATCC TGCAAATC TGC TGCAAATCGGTGTAAAC

Výsledek sekvencování TGCAAA TGCAA TGCA TGCAAATCGGTGTA TGCAAATCC TGCAAATC TGC TGCAAATCGGTGTAAAC TGCAAA TGCAAATCGGTGT TGCAAATCGGT TGCAAAT TGCAAATCGGTGTAAACGGT TGCAAATCG TGCAAATCGG TGCAAATCGGTG TGTG

Purifikace produktů Komerční souprava „DyeEx 2.0 Spin Kit“  pryskyřice  odstraní dideoxyterminátory  odstraní anorganické zbytky reakce

Kapilární elektroforéza Genetic Analyzer 3130 Applied Biosystems  rozdělí produkty sekvencování podle velikosti  detekuje fluorofory laserem