BARVENÍ MIKROSKOPICKÝCH PREPARÁTŮ (BIOLOGICKÁ TECHNIKA)

BARVENÍ je biochemická metoda, kterou se přidá k substrátu specifická barvící látka (barvivo) a slouží v biologii k prokázání výskytu (kvalifikaci) nebo množství (kvantifikaci) specifické látky ve zkoumané tkáni nebo v pletivu, nebo k obarvení celých struktur a objektů. Jednotlivé buněčné struktury nejsou v mikroskopu při pozorování bez předchozího zbarvení téměř rozlišitelné pro stejný nebo jen málo odlišný lom světla. BARVIVA Přirozená Umělá Kyselá Zásaditá Neutrální

Přirozená barviva: hematoxylin - extrakt z kampeškového dubu (Haematoxylon campechianum) - bazické barvivo

Přirozená barviva: karmín - extrakt ze samiček červce nopálového (Coccus cacti) - bazické barvivo

Přirozená barviva: orcein - extrakt z některých lišejníků

Přirozená barviva: šafrán - extrakt z blizen šafránu (Crocus sativus) - kyselé barvivo - na kolagen

Přirozená barviva: V minulosti bylo užíváno více přirozených barviv, např.: indigokarmín berberin - kyselé barvivo brazilin - bazické barvivo podobné hematoxylinu

Umělá barviva: A/ XANTINOVÉ DERIVÁTY eosin (tetrabrom fluorescein) - barví acidofilní složky tkání

Umělá barviva: erytrosin (tetrajodfluorescein) - barví acidofilní složky tkání fluorescein

Umělá barviva: B/ TRIFENYLMETANOVÁ BARVIVA bazický fuchsin - základ i pro další barviva jako jsou Schiffovo reagens, rezorcifuchsin a aldehydfuchsin anilínová modř, světlá zeleň a kyselý fuchsin - kyselá barviva

Umělá barviva: C/ THIAZINOVÁ BARVIVA thionin, toluidinová a methylenová modř - bazická barviva D/ AZOBARVIVA Janusova zeleň - např. pro supravitální barvení mitochondrií olejová červeň a sudanová čerň - barviva na tuky

Kyselá, barvící plasmu (též plasmatická) - eosin, světlá zeleň, oranž G, kyselý fuchsin,… Zásaditá, basická, barvící jádro (též jaderná barviva) - toluidinová modř, metylová zeleň, basický fuchsin, hematoxylin Neutrální - např. eosinát methylenové modři.

TYPY BARVENÍ: A1/ progresivní - barvíme až je dosaženo žádaného zbarvení, A2/ regresivní - napřed tkáň přebarvíme, pak přebytečné barvivo odstraňujeme. B1/ sukcedánní - několik barviv po sobě, B2/ simultánní - více barviv současně. - v obou případech musí každé barvivo barvit jinou část tkáně C1/ substantivní - tkáň barvíme přímo barvivem, C2/ adjektivní - barvení prostřednictvím mořidla, které se váže přímo na tkáň Vitální barvení je způsob, kdy je tkáň barvena za živa. Rozeznáváme barvení intravitální, kdy barvíme přímo v těle zvířete a barvení supravitální, kdy barvíme z těla vyňatou tkáň.

Vitální barvení: karmín - potravní vakuoly Janusova zeleň - mitochondrie Methylenová modř - odliší živé buňky od mrtvých; živé buňky se neobarví, proto- že pumpují modř ven. Výběr barviva závisí na objektu barvení a strukturách, které chceme barvit: Motolice, tasemnice - borax-karmín Prvoci - Giemsa-Romanowski, hematoxylin Tkáně - hematoxylin-eosin Barvení povrchového reliéfu - opálová modř, Burriho tuš.

POZORUJTE A ZAKRESLETE!!! ÚKOLY: 1/ Pozorování a barvení živých prvoků z nálevu Postup: na podložní sklo dejte kapku nálevu a přikryjte (pro zvolnění rychlosti pohybu prvoků poslouží vata) vedle krycího sklíčka kápněte: kapku inkoustu - je vidět cytostom a trichocysty kapku tuše - je vidět plnící se potravní vakuola. 2/ Barvení trepek aj. nálevníků po usmrcení na podložní sklo dejte po kapce trepek, usmrťte kapkou Lugolova roztoku, který přikápnete (3-6 minut), přikryjte krycím sklíčkem vedle krycího sklíčka z jedné strany kápněte kapku modrého inkoustu, obarví se jádro (makronukleus) z druhé strany přikápněte kapku červeného inkoustu, obarví se cytoplazma. POZORUJTE A ZAKRESLETE!!!