Mutace genu pro Connexin 26 jako významná příčina nedoslýchavosti Petr Lesný1, Pavel Seeman2, Daniel Groh1 1ORL klinika UK 2. LF a FN Motol Subkatedra dětské ORL IPVZ Přednosta doc. MUDr. Zdeněk Kabelka 2Klinika dětské neurologie DNA laboratoř UK 2. LF a FN Motol

Obsah Prelingvální poruchy sluchu Connexin 26 Typická anamnéza a vyšetření Naše výsledky

Poruchy sluchu Nejčastější a nejzávažnější (WHO) smyslová vada u lidí Prelingvální, perilingvální a postlingvální Prelingvální hluchota 1:1000 případů Více než 50% na genetickém základu (např. geny POU3F4, myosin 7A, otoferlin, pedrin, connexin 31)

Prelingvální poruchy sluchu Vrozené (~60%) Získané (40%) Spojené s určitým syndromem (~30%) Nesyndromové (~70%) syndromy: Usher, Alport, Pendred Autozomálně recesivní (80-85%) Autozomálně dominantní (~15%) X-vázané a mitochondriální (<5%) (dnes již >30 genů) Mutace genu GJB2 kódujícího connexin 26 (80%)

Connexin 26 (Cx26) Connexiny Membránové proteiny Součásti gap-junction (je tvořena 6 molekulami connexinu) Umožňují pohyb malých molekul a iontů mezi buňkami Connexin 26 – tkáňově specifický (spojuje navzájem podpůrné bb. v hlemýždi)

Connexin 26 (Cx26) Na+-specifické iontově selektivní kanály Iontově selektivní kanály tvořené Connexinem 26 Umožňuje recirkulaci iontů K+ zpět do endolymfy v průběhu zvuku  repolarizaci buněk

Mutace genu pro Cx26 Gen GJB2 na chromosomu 13q11 Jsou zodpovědné za 60-80% AR vrozených nesyndromických ztrát sluchu  za 20-30% prelingválních ztrát sluchu Četnost heterozygotů (nosičství) v Evropě je 1:31 (stejně jako například CF) Není závislost mezi typem mutace Cx26 a závažností ztráty sluchu Prokázán founder efekt (existence hypotetického společného předka) Van Laer, 2001 i u dvojčat http://www.iro.es/cx26deaf.html

Heterozygoti pro Connexin 26/30 Mutace v genu GJB6 kódujícím Connexin 30 je druhá nejčastější genetická příčina vrozené prelingvální nesyndromické poruchy sluchu Heterozygoti pro Connexin 26 (odpovídající diagnostickým kritériím)  mohou mít mutaci Connexinu 30 del Castillo, 2002

Genetické vyšetření mutací Cx26 Ve světě dnes již běžné „Malý gen“ umožňuje rutinní genetické vyšetření Některé mutace jsou velmi časté (mutace 35delG je nacházena v Evropě až v 80% případů) Genetické poradenství, prenatální diagnostika, prognóza pro CI? možná negativní reakce neslyšících rodičů

Typická anamnéza RA: autozomálně recesivní typ vady: obě pohlaví jsou postižena stejně často rodiče mívají sluch normální sourozenci mohou být postižení (25%) 25% potomků, zdravé děti

Typická anamnéza OA: Vyloučení získaných vad kongenitální infekce (rubeola, VZV, CMV, EBV, toxoplasmóza, lues apod.) asfyxie u porodu, porodního traumatu, prolongované UPV, Rh inkompatibilita apod. kraniofaciální malformace ototoxické léky vady spojené s genetickými syndromy u nedonošenců pod 1500g je časté krvácení do labyrintu OA spočívá v…

Typický nález Vyšetření svědčí pro bilaterální percepční ztrátu sluchu… otomikroskopie: vyloučeny anomálie zevního zvukovodu tympanometrie: křivka „A“ OAE: nevýbavné audiometrie: křivka plochá nebo klesající (největší ztráta je na 4000-8000 Hz)

Diagnostika ORL a pediatrické vyšetření zařazující kritéria vylučující kritéria Genetická konzultace se sestavením rodokmenu, informovaný souhlas Odběr krve či použití krevních skvrn – „Guthrie karet“ DNA vyšetření nejčastějších mutací – 35delG Sekvenování genu pro nalezení méně častých mutací Genetická konzultace - dovyšetření rodičů, sdělení výsledků

Závěr Poměr mezi vrozenými a získanými prelingválními ztrátami sluchu stoupá 20-30% prelingválních ztrát sluchu je způsobeno mutací genu pro Connexin 26 Vyšetření mutací Cx26 v ČR? Umožnění genetického poradenství i prenatální diagnostiky

První výsledek v ČR: (2001) prenatální diagnostika v rodině pacienta s kochleárním implantátem Pavel.Seeman@lfmotol.cuni.cz

Molekulárně genetické vyšetření genu Cx26 Potvrzení či vyloučení hlavní mutace 35delG fragment analýza - přítomnost fragmentu o 1 bp kratšího (většina postižených jsou homozygoti) nebo přímé sekvenování genu V případě „nehomozygota“ pro 35delG dovyšetření všech dalších mutací pomocí sekvenování celého kódujícího úseku ve 2 PCR fragmentech Vyšetření rodičů a sourozenců pro zjištění původu mutace Pavel.Seeman@lfmotol.cuni.cz

Kritický úsek sekvence genu Cx26 normální DNA sekvence - 6xG 1G často u pacientů chybí Pavel.Seeman@lfmotol.cuni.cz

První vyšetření v ČR a první potvrzený pacient Matka Neslyšící dítě Plod Otec Pavel.Seeman@lfmotol.cuni.cz

Zpráva Neslyšící pacient je homozygotem pro nejběžnější mutaci genu pro Cx26: 35delG Rodiče jsou heterozygoti pro tuto mutaci, 25% riziko postižení dalších potomků Plod je zdravý homozygot - neměl by být postižen poruchou sluchu závislou na mutaci Cx26 Pavel.Seeman@lfmotol.cuni.cz

Druhý výsledek: vyšetření pacientů s kochleárními implantáty a kongenitální etiologií poruchy sluchu (2002) Předpoklad častého výskytu mutace. Celkem vyšetřeno (II/2002) 29 pacientů. bez mutace: 13 pacientů heterozygoti: 2 pacienti homozygoti pro Cx26: 14 pacientů

Děkuji za pozornost