Borrélie – úskalí laboratorní diagnostiky RNDr. Alena Lehovcová

U LB je diagnostika založena na klinických symptomech, objektivních nálezech, případně na údajích o přisátí klíštěte. Při stanovení diagnózy se nesmí zapomínat na jiná onemocnění. Testování se nedoporučuje,pokud chybí symptomy LB nebo při jasných klinických příznacích – EM !

Laboratorní metody -přímý průkaz patogena - metody založené na detekci protilátek (odpověď na infekci)

Přímá detekce patogena: Mikroskopie v temném poli ELMI kultivace PCR Poznámky: -tyto metody musí být hodnoceny v kontextu s klinickým obrazem. -lze –li po terapii dále prokázat bakterii B.b., je to důkaz selhání terapie.

PCR - DNA detekce Díky možné kontaminaci přináší více falešně pozitivních výsledků než kultivace Pozn.: negativní výsledek nevylučuje LB Pozor na speciální nároky na odběr materiálu!

Metody založené na detekci protilátek NIF ELISA Western blot CDC doporučuje dvoustupňový postup: Screeningové testy IFA nebo ELISA konfirmace Western blot - specifický

Screeningové testy IFA nebo ELISA a) IgG a IgM negativní, vysoce nepravděpodobné, že jde o LB. Výjimka: test proveden ve velmi časné fázi nemoci, pak opakovat vyšetření v párovém vzorku. b) IgG nebo IgM je pozitivní nebo hraniční, následuje další krok (tyto testy příliš senzitivní, ale nespecifické, pozitivní i u lidí bez LB)

Western blot – specifický separace specifických a nespecifických proteinů přítomny všechny relevantní antigeny charakterizace antigenu referenčními monoklonálními protilátkami NEDOPORUČUJE SE provádět bez prvního kroku (zvyšuje se pravděpodobnost falešně pozitivních výsledků)

Interpretace výsledků Western blot a) IgM negat a IgG negat - buď: časná fáze (pozitivita WB později než v ELISA) - nebo: první krok byl metodou ELISA pravděpodobně falešně pozitivní Vyšetření opakovat za 3 - 4 týdny.

b) IgM pozit and IgG negat - opakovat test za několik týdnů IgM+ stále přetrvává, příznaky pravděpodobně nejsou způsobeny LB ! c) IgG silně pozitivní - v testu vidíme široké spektrum proužků - jde o přítomnost protilátek, ne nutně o onemocnění ( např. lesní dělníci )

d) IgG hraniční - klinické příznaky trvají, opakovat za dva týdny

Důvody falešné pozitivity Důsledek polyklonální aktivace B lymfocytů v kontextu : - s infekcí EBV - jiných herpetických virů - autoimunitních onemocnění Často zůstává důvod falešně pozitivních IgM neobjasněn

VLIV ATB TERAPIE IgG protilátky přetrvávají velice dlouho i po úspěšné léčbě. Kritérium úspěšné léčby klinický stav nebo stabilizace sérologického nálezu Pokles hladiny protilátek nevylučuje perzistenci patogenního organizmu. Sérologické nálezy nejsou vhodné jako kritérium úspěšnosti léčby. Časná ATB léčba může zabránit vývoj měřitelných hladin protilátek u primoinfekcí

ZDROJE CHYB PŘI SÉRODIAGNOSTICE falešně negativní výsledky - rozdíl v Ag použitém v testu od Ag, který způsobil infekci - diagnostická okna falešně pozitivní výsledky - zkřížené reakce s bakteriálními antigeny - autoimunita

DALŠÍ TESTY V poslední době nedoporučovány CDC testování antigenu v moči imunofluorescenční barvení buněčných stěn testování klíšťat

ZÁVĚREM Odběr krve provést za měsíc po přisátí klíštěte Při stanovení diagnózy musí být určujícím kritériem klinický obraz, všechny dg metody jsou podpůrné V případě podezření na LB nutno žádat dvoustupňový postup testování

Otázky ? Odpovědi !