Vypracovala: Ing. Andrea Brtková, PhD. Laboratórne metódy a postupy pri vyšetrovaní vzoriek odobratých pri podozrení na nákazu MVP Vypracovala: Ing. Andrea Brtková, PhD.

Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu Pôvodca MVP: Paenibacillus larvae - grampozitívna fakultatívne anaeróbna sporulujúca baktéria v tvare tyčinky - tvorí spóry – veľmi rezistentné voči vysokej teplote (deštrukcia v mede po 8,6 min., pri 121°C; vo vosku po 30 min., pri 121°C) nedisponujú enzýmom kataláza štiepi H2O2 (opak iný Bacillus spp.) rod Paenibacillus biochemicky aktívny (štiepi široké spektrum anorg. substrátov) produkcia pyrazínov (charakteristická vôňa na kultivačných médiách) produkcia enolázy – štiepi proteíny – virulenčný faktor vysoká genotypová variabilita dokázaná fingerprintingom NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín

Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu Klinická prehliadka - hodnotí: - sila včelstva a jeho prejavy - intenzita a kvalita plodovania, rovnomernosť zakladania - celková úroveň a hygiena chovu Odber vzoriek k laboratórnemu vyšetreniu: - včelí plást s plodom alebo zásobami - med - melivo, vosk ďalší materiál (peľ, materská kašička, propolis, dospelé včely) NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín

Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu Vzorky je nutné dobre zabaliť (papierový sáčok, papierový obal ...) s presným označením mena a adresy + dôkladne vyplnená žiadanka veter.lekárom resp. povereným asistentom Laboratórne metódy: Mikroskopické: natívne preparáty (fázová mikroskopia), farbené preparáty (Gramovo farbenie, Schaefer Fulton acidorezistentné farbenie) B) Kultivačné metódy: krvný agar, MYPGP agar, MYPPN agar; inkubácia: aeróbne, pri 34-37ºC po dobu 4-5 dní C) Detekcia pôvodcu MVP na úrovni molekulárnej biológie NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín

Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu Kultivácia pôvodcu MVP z meliva: extrakcia: 1,5 g meliva + extrakčné činidlo = 1h trepať pridať extrahovanú zmes k dH2O v pomere 1:3 5 minút povariť pri teplote 88-91ºC (aktivácia spór, deaktivácia sprievod.MIO) pretrepať vyočkovať 5 x 0,2 ml na kultivačné média kultivácia 4 – 5 dní, pri teplote 37 ºC (chyby) Kultivácia pôvodcu MVP z plástov: pri zaviečkovanom plode uvoľníme pomocou sterilného skalpela viečko bunky k zaschnutým larvám a príškvarom - kvapka sterilnej dH2O obsah 5 – 10 podozrivých buniek – naočkovať na 5 PM s Krvným agarom Kultivácia pôvodcu MVP z medu a peľu: zriediť med so sterilnú dH2O v pomere 1:1, v prípade peľu v pomere 1:10 - kultivácia 4 – 5 dní, pri teplote 37 ºC (chyby) NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín

Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu v NRL 2010, 2011, 2012: Národný eradikačný program moru včelieho plodu (MVP) trvanie NP: jeden rok, v prípade nepriaznivej epizootologickej situácie pokračovanie aj v ďalšom roku vyšetrenie zmesných vzoriek zimného meliva: u všetkých chovateľov matiek; kočujúcich včelstiev + melivo klinická prehliadka + klinické zmeny vyšetrenie plod. plástu + plodový plást laboratórne potvrdenie MVP opatrenia na zabránenie šírenia MVP NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín

Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu v NRL Slovensko - melivá: r.2010: celkom: 3922 / (+) 93 = 2% r.2011: celkom: 4921 / (+) 196 = 4% ‹50 KTJ/1g meliva; ›50-150; ›150-250; ›250-500; ›500 r.2011 89 58 21 13 15 Slovensko - plásty: r.2010: celkom: 379 / (+) 260 = 69% r.2011: celkom: 715 / (+) 527 = 73% - nesúlad: (+) melivo – nevyšetrený plást nevyšetrené melivo – vyšetrený plást NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín

Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu v NRL Západné Slovensko: r.2010: celkom: 731 / (+) 17 = 2,3% r.2011: celkom: 983 / (+) 49 = 5,0% pozitivita v roku 2011 stúpla oproti r.2010 (viac vyšetrených vzoriek) TN – 11% nárast; SC – 6,5% (výnimka TT pokles o 10%) Plásty: r.2011: celkom: 148 / (+) 125 = 84% r.2010: celkom : 77 / (+) 58 = 75% NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín

Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu v NRL Južné Slovensko: r.2010: celkom: 1120 / (+) 30 = 2,7% r.2011: celkom: 1626 / (+) 65 = 4,0% pozitivita v roku 2011 stúpla oproti r.2010 (viac vyšetrených vzoriek) RS – 11% nárast; NZ – 9,7% (naopak pokles: DS - 3%; GA – 4,5%) Plásty: r.2011: celkom: 150 / (+) 127 = 85% r.2010: celkom : 68 / (+) 18 = 26% NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín

Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu v NRL Severné Slovensko: r.2010: celkom: 956 / (+) 17 = 1,78% r.2011: celkom: 1440 / (+) 40 = 6,25% pozitivita v roku 2011 stúpla oproti r.2010 (viac vyšetrených vzoriek) ZA – 8,5% nárast; DK – 3,5% (naopak pokles: MT 11%) Plásty: r.2011: celkom: 349 / (+) 213 = 61% r.2010: celkom : 150 / (+) 108 = 72% NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín

Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu v NRL Východné Slovensko: r.2010: celkom: 1115 / (+) 29 = 2,60% r.2011: celkom: 896 / (+) 42 = 4,69% pozitivita v roku 2011 stúpla oproti r.2010 (viac vyšetrených vzoriek) RO – 52% nárast; PE – 43% (naopak pokles: MI 20%) Plásty: r.2011: celkom: 68 / (+) 62 = 91% r.2010: celkom : 84 / (+) 76 = 90% NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín

Diagnostika pôvodcu moru včelieho plodu v NRL NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín

Program dohľadu nad zdravotnou situáciou v chovoch včiel v SR Cieľ programu: zistiť zdravotnú situáciu včelstiev u  registrovaných chovateľoch včiel na celom území SR  na základe zistených výsledkov vypracovať stratégiu na zabránenie znižovania počtu včelstiev v rámci programu sa budú sledovať: AFB, EFB, varoáza, akarióza, Aetina Tumida, Tropilaelaps clarae (SK free), nozematóza, vírus chronickej paralýzy včiel, vírus akútnej paralýzy včiel a vírus deformovaných krídel ozdravením chovov sa zlepší zdravotný stav, znížia sa straty na produkcii medu a ďalších včelích produktov, zabezpečí sa optimálne opelenie poľnohospodár. kultúr a ostatných rastlín klinické prehliadky, odber meliva a vzoriek, laboratórna diagnostika úradných vzoriek a ostatné náklady potrebné na realizáciu programu = hradené zo štátneho rozpočtu SR NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín

Program dohľadu nad zdravotnou situáciou v chovoch včiel v SR štruktúra programu: 3. klinické prehliadky – úradní veterinárni lekári + školení asistenti I. prehliadka: zhromaždenie údajov - pracovné postupy včelárov, životného prostredí, v ktorom sú včelíny umiestnené, životaschopnosť a zdravotný stav včelstva II. prehliadka: zistenie abnormálnej úmrtnosti, pri príznakoch ochorenia – odber vzoriek na laboratórne vyšetrenie. Včelár bude upozornený na potrebu samokontroly a povinnosti hlásenia úhynu alebo abnormálneho správania včiel III. prehliadka: zistenie abnormálnej úmrtnosti, životaschopnosti a zdravotného stavu včelstiev – odber vzoriek na laboratórne vyšetrenie NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín

Program dohľadu nad zdravotnou situáciou v chovoch včiel v SR Kraj Počet včelstiev Počet vyšetrených včelstiev Bratislavský 484 18 Trnavský 1302 49 Trenčiansky 2464 93 Nitriansky 2036 77 Žilinský 2667 101 Banskobystrický 2799 106 Prešovský 2609 98 Košický 2068 79 Spolu 16429 621 NRL pre choroby včiel – Dolný Kubín

Ďakujem za pozornosť