Detekce mutací v myelin protein zero (MPZ) genu u pacientů s dědičnými neuropatiemi – první nálezy mutací v ČR P. Seeman, P. Šušlíková, V. Beneš, M. Čtvrtečková, R. Mazanec Klinika dětské neurologie a Neurologická klinika dospělých UK 2. LF a FN Motol Praha

Dědičné periferní neuropatie CMT, HMSN HMSN – hereditární motoricko sensitivní neuropatie CMT-Charcot-Marie-Tooth – synonymum Dědičné neuropatie – distální svalová slabost, distální atrofie svalů, poruchy citlivosti, typické nálezy na EMG a biopsii nervu, dědičnost většinou AD, někdy GD, vzácně AR CMT 1 – demyelinizační – častější CMT2 – axonální - vzácnější Nejčastějším (70%) DNA defektem u CMT je duplikace PMP22 genu na 17p , dále geny Cx32, MPZ, bodové mutace v PMP22 – typ 1 V poslední době genové defekty u CMT2

HMSN chromosomální lokalizace a geny

Myelin protein zero (MPZ).

173bp 307bp 278bp 309bp exon 1 exon 2 exon 3exon 4exon 5 MPZ gen schema exon 6

Heterogenita a polyfenie u HMSN/CMT Heterogenita - podobný fenotyp způsoben mutacemi v různých genech Polyfenie -mutace v jednom genu způsobují velmi odlišné fenotypy

Odlišné, různé HMSN fenotypy spojené s mutacemi v MPZ genu. Charcot – Marie – Tooth type 1B (demyelinating) Dejerine – Sottas neuropatie (DSN) Kongenitální hypomyelinizace (CHN) Charcot – Marie – Tooth typ 2 (axonální) - „novinka“

Výběr pacientů klinické a elektrofyziologické příznaky svědčí pro onemocnění CMT 1 nebo CMT 2 vyloučena duplikace / delece oblasti 17p. obsahující gen PMP 22 vyloučení mutace v genu pro Connexin 32 ( v indikovaných případech, kde dle rodokmenu není přenos z muže na muže)

Vyšetření MPZ genu u CMT Kompletně vyšetřeno 6 pacientů ve všech 6 exonech MPZ genu Exon 3, kde bylo popsáno nejvíce mutací byl vyšetřen u 26 pacientů s CMT 1 i 2 Nález 3 různých mutací v MPZ genu u 3 rodin, 2 z mutací již popsané, 1 mutace nová - zvláštní fenotyp i průběh, nález 2 silent polymorfizmů

Metodika - izolace DNA z periferních lymfocytů - PCR amplifikace fragmentů obsahující exony 1, 2, 3, 4, kontrolní agarosová elektroforesa - purifikace PCR produktů pomocí kolonek QIAquick - koncentrační gel s vyčistěnými produkty - sekvenační reakce pomocí kitu Big Dye Terminator - alkoholová precipitace sekvenačních reakcí - elektroforesa a analýza na automat. sekvenátoru ABI porovnání sekvence získané se sekvencí publikovanou

Axonální fenotyp – CMT2, pozdní začátek Rodina F.

Progresivní hluchotaProgresivní hluchota a nereagující zornice (Argyll - Robertsonovy) jako první příznaky CMT Periferní neuropatie u matky a jejího otce, klinický obraz (atrofie distálního svalstva) doprovázen elektrofyziologickým nálezem axonálního typu postižení, biopsie – axonální postižení, syn klinicky zdráv, elektrofyziologicky hraniční nález,

distální atrofie a slabost

no pes cavus, severe footdrop pronounced hand muscle atrophies

Nerve and muscle biopsy in nr. 622 (mother) Normal control nervemuscle

290 A>T (Glu97Val) in MPZ gene

MPZ protein mutace Glu 97 Val - rodina F. Glu 97 Val

Demyelinizační typ postižení se závažnými klinickými projevy HMSN III – Dejerine-Sottas Rodina K.

Mutace Arg98Cys – sousední aminokyselina k předchozímu případu

Rodina K. Matka:- velmi časné postižení – od předškolního věku, hypertrofická demyelinizační neuropatie (onion bulbs), HMSN III, její rodiče zdraví, pac ve třetí dekádě postupná ztráta sluchu, Syn: podobné a též velmi časné postižení – typ HMSN III, nikdy nebyl schopen normální samostatné chůze psychický vývoj normální (vystudoval obchodní školu opožděný motorický vývoj oba mají zpomalenou reakci zornic na osvit

Rodina K. matka syn

MPZ protein Arg98Cys - rodina K. Arg 98 Cys

MPZ protein Arg98Cys - rodina K. Mutace de-novo u matky, Mutace má dominantní efekt – nalezena u obdobně postiženého syna

Mutace T124M v MPZ proteinu Thr 124 Met

Rodina L. Probandka – obtíže od 38 let, sensitivní obtíže, pak progresívní polyneuropatie, vyšetření EMG axonální polyneuropatie Abnormální reakce zornic od asi 16 let, výrazně zpomalená fotoreakce ( na osvit), pozorováno i u dcery a syna, ti dosud klinicky bez polyneuropatie Vyšetřena dosud pouze probandka, příbuzní se dosud nedostavili

Thr 124 Met

Polymorfizmus Ser 228 Ser

MPZ protein Glu 97 Val Thr 124 Met Arg 98 Cys

Závěry Mutace v MPZ genu u různých CMT fenotypů – CMT1 i CMT2 Zvláštní fenotyp u některých mutací – axonální neuropatie, abnormální reakce zornic, hluchota, pozdní začátek Mutace v MPZ jsou 3. nejčastější příčinou CMT/HMSN U pacientů s CMT2 vyšetřovat MPZ gen