Provedení DNA – otisků prstů

Prezentace na téma: "Provedení DNA – otisků prstů"— Transkript prezentace:

1 Provedení DNA – otisků prstů
DNA-Fingerprint

2 Zkumavky do každé pracovní skupiny
DNA-Fingerprint

3 Podezřelí 1 - 5 Zkumavky obsahují 10µl vzorku DNA
70 µl Enzymová směs 10 µl CS DNA 0,24 g Agarózy 80 µl nanášecí pufr 10 µl DNA -marker DNA-Fingerprint

4 1. Příprava štěpení (restrikce) DNA
DNA-Fingerprint

5 Pozor! U každého pipetování použij novou pipetu, aby se zabránilo kontaminaci. Pro důkladné promíchání prosím protřepávejte poklepáváním všechny zkumavky nejméně po dobu 30 sekund. DNA-Fingerprint

6 1. Zkumavky s DNA vzorky DNA 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl
CS S S S S 4 S 5 DNA 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl DNA-Fingerprint

7 1.1 Napipetujte 10 µl enzymové směsi do každé zkumavky
CS S S S S 4 S 5 DNA 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl Enzyme- 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl 10µl mix (ENZ) DNA-Fingerprint

8 2. Restrikce DNA pomocí enzymů
Zkumavky v plováku nechejte ve vodní lázni inkubovat po dobu 20 minut při teplotě 37 ° C DNA-Fingerprint

9 3. Příprava gelové elektroforézy
DNA-Fingerprint

10 3.1 Příprava elektroforézní komory
Hřeben Kovové plíšky Sáňky Vložte gelovou vaničku s kovovými plíšky a hřebenem do elektroforézní komory. DNA-Fingerprint

11 3.2 Produkce agarózového gelu (0,8%)
Dejte 0,24 g agarózy + 30 ml TAE (Tris-acetád-EDTA) -pufru do 250 ml Erlenmayerovy baňky. Vařte Erlenmeyerovu baňku krátce v mikrovlnné troubě, promíchejte, a vařte krátce znovu. DNA-Fingerprint

12 3.3 Nalévání gelu Nalijte gel v 55 °C do gelové vaničky. Upozornění:
Otestujte teplotu na hřbetu ruky. Nehýbejte s gelem dokud zcela neztuhne! DNA-Fingerprint

13 3.4 Elektroforézní komora
Jakmile gel ztuhne, odstraňte kovové plíšky z gelové vaničky. Naplňte komoru 270 ml TAE-pufru tak, aby jím byl gel celý pokryt. Vytáhněte hřebínek. DNA-Fingerprint

14 4. Příprava DNA-markeru Pipetujte 10 µl nanášecího pufru (LB) do 10 µl DNA markeru - označte (M). DNA-Fingerprint

15 5. Přidání10 µl nanášeného pufru
Napipetujte 10 µl nanášecího pufru do CS and S1 – S5. 10 µl 10 µl 10 µl DNA-Fingerprint

16 6. Plnění jamek Pamatuj na pořadí! Levou jamku nechej volnou
Napipetujte 20 µl z každého vzorku a 20 µl z DNA markeru (M) do jamek Pamatuj na pořadí! Pořadí: naplňuj zleva doprava DNA-Fingerprint

17 6. Plnění jamek Pozor! Nesmíte porušit gelovou jamku! DNA-Fingerprint

18 7. Gelová elektroforóza (při napětí 120 V cca 30 min)
Zastavte elektroforézu, až se modrý pruh posune 1 cm před konec gelu. DNA-Fingerprint

19 8. Zviditelnění DNA Přeneste gel opatrně do barvicí nádoby a přelijte ho 60 ml barvícího roztoku, nechte působit cca 2 min. Slijte barvicí roztok zpět do Erlenmayerovy baňky. DNA-Fingerprint

20 9. Analýza gelu Který z podezřelých je pachatelem? CS S1 S2 S3 S4 S5 M
DNA-Fingerprint

21 9. Výsledek DNA-Fingerprint