a) MONOCHROMATICKÉ A b) GRAMOVO BARVENÍ elektronová mikroskopie světelná mikroskopie procházející zástin fázový fluorescence světlo kontrast imunofluorescence.

Prezentace na téma: "a) MONOCHROMATICKÉ A b) GRAMOVO BARVENÍ elektronová mikroskopie světelná mikroskopie procházející zástin fázový fluorescence světlo kontrast imunofluorescence."— Transkript prezentace:

1

2

3 a) MONOCHROMATICKÉ A b) GRAMOVO BARVENÍ

4 elektronová mikroskopie světelná mikroskopie procházející zástin fázový fluorescence světlo kontrast imunofluorescence nativní preparát barvený preparát MIKROSKOPICKÉ METODY V MIKROBIOLOGII

5 elektronová mikroskopie světelná mikroskopie procházející zástin fázový fluorescence světlo kontrast imunofluorescence nativní preparát barvený preparát MIKROSKOPICKÉ METODY V MIKROBIOLOGII

6 Barvený preparát má největší význam v bakteriologii  hodnocení morfologie, velikosti a uspořádání bakterií fixace preparátu (usmrcování bakterií)  mrtvé mikroorganismy přijímají barviva lépe teplem - mikrobi s pevnou buněčnou stěnou chemicky - šetrnější  prvoci

7 1a) MONOCHROMATICKÉ BARVENÍ

8 je pouze orientační poskytuje informace o velikosti, tvaru a seskupení mikrobů informace o vzájemných kvantitativních poměrech jednotlivých mikrobiálních morfotypů a ostatních elementů ve vyšetřovaném materiálu

9 Stručný postup barvení 1. fixace teplem 2. barvení methylenovou modří 1 minutu 3. oplach vodou 4. sušení 5. pozorování imerzí

10 1b) BARVENÍ DLE GRAMA

11 nejdůležitější barvící metoda v mikrobiologii důležité kritérium při klasifikaci bakterií umožňuje rozlišení mikrobů na skupinu Gram-pozitivních Gram-negativních

12 Proč je to tak důležité??! G+ a G- bakterie se liší: biologickými vlastnostmi (toxicita, antigenicita) citlivostí na antibiotika a chemoterapeutika z klinického hlediska je významné pro cílenou léčbu antibiotiky

13 Odlišná barvitelnost je způsobena rozdíly v chemické struktuře bakteriální stěny: Buněčná stěna gram-pozitivních bakterií „silnější“ polysacharidy (peptidoglykan, kyseliny teichoové) aminokyseliny (tetrapeptidy, spojovací můstky) popř. bílkoviny (protein M, protein A)

14

15 Odlišná barvitelnost je způsobena rozdíly v chemické struktuře bakteriální stěny: Buněčná stěna gram-pozitivních bakterií „silnější“ polysacharidy (peptidoglykan, kyseliny teichoové) aminokyseliny (tetrapeptidy, spojovací můstky) popř. bílkoviny (protein M, protein A)

16 Odlišná barvitelnost je způsobena rozdíly v chemické struktuře bakteriální stěny: Buněčná stěna gram-negativních bakterií „tenčí“ lipidy (rozpustnost v alkoholu) polysacharidy (lipopolysacharidy, peptidoglykan) bílkoviny

17 Postup barvení

18 Postup barvení fixace teplem krystalová violeť 20 s Lugolův roztok 20 s aceton-alkohol 10 – 20 s oplach vodou safranin 30 – 60 s oplach vodou osušení prohlížení imerzním objektivem

19

20

21 Hodnocení preparátu nemikrobiální elementy - epitelie - leukocyty - erytrocyty (četnost) - buněčný detritus mikrobiální elementy - G+ koky - G- koky - G+tyčinky - G- tyčinky - ostatní – kvasinky, plísně příp. prvoci Při hodnocení mikrobů popisujeme četnost, G+ nebo G-, tvar, uspořádání, velikost

22 Streptococcus sp

23 Staphylococcus sp.

24 Staphylococcus v hemokultuře

25 Clostridium sp.

26 Corynebacterium sp.

27 Aktinomyces sp.

28 Campylobacter

29 Neisseria sp.

30 Bacteroides sp.

31 enterobakterie s pouzdrem (chrání bakterie před imunitním systémem těla)

32 Kvasinky (G+)

33

34

35