Vladimír Celer VFU Brno. Mikrobiologické vyšetření Přímý průkazNepřímý průkaz - sérologie  Kultivace  Mikroskopie  PCR, RT-PCR, qPCR…  ELISA (antigen.

Prezentace na téma: "Vladimír Celer VFU Brno. Mikrobiologické vyšetření Přímý průkazNepřímý průkaz - sérologie  Kultivace  Mikroskopie  PCR, RT-PCR, qPCR…  ELISA (antigen."— Transkript prezentace:

1 Vladimír Celer VFU Brno

2 Mikrobiologické vyšetření Přímý průkazNepřímý průkaz - sérologie  Kultivace  Mikroskopie  PCR, RT-PCR, qPCR…  ELISA (antigen capture)  Imunohistochemie  In-situ testy  sekvenování  ELISA  Imunoblot  Imunodifuzní test  Rychlé chromatografické testy  Hemaglutinační test

3 Akreditované laboratoře  Český institut pro akreditaci (ČIA)  Akreditovaná = důvěryhodná  Management kontroly kvality  Systémová i odborná kontrola  Velká zátěž pro laboratoř (finanční, práce)  Vyšší cena vyšetření

4 Přímý průkaz  Jednoduché stanovení diagnózy  Možnost typizace, sekvenování  Nevhodné pro „ubikvitární“ viry (cirkoviry, aviární leukóza, Markova choroba…)  Jediné vyšetření - FeLV  Náročné na odběr a uchování vzorku

5 Přímý průkaz  Správný odběr a zpracování vzorku  Časově, množství a typ vzorku  Transport  Teplota transportu a skladování  Anamnéza

6 Kdy odebírat vzorky? Viremie IgM IgG

7 Úskalí molekulárních metod  Know -how  Detailní znalost genomu  Validace protokolu (specifita, senzitivita)  Náchylnost k nespecificky pozit. výsledkům

8 Sekvenování  Vhodný úsek genomu  Dostatečný počet čtení  Typizace kmenů viru  Odlišení vakcinačních a terénních kmenů

9 Vaiabilita PRRS viru (ORF5)

10 Variabilita viru PRRS (Nsp)

11 Nepřímá diagnostika  Často stájová diagnostika  Výjimečně definitivní dg. (lentiviry), někdy nutné párové vzorky  Nevhodné pro „ubikvitární“ viry (cirkoviry, aviární leukóza, Markova choroba… ale i FeLV..)  Obtížná typizace  Jednoduchý odběr a uchování vzorku (sérum, sliny, CSF)

12 Dynamika tvorby protilátek

13 Nepřímé ELISA testy  1. generace  Kultivace virů, bakterií  2. generace  Rekombinantní proteiny  3. generace  Peptidové antigeny

14 Interpretace ELISA  Stanovení cut off hodnoty Rozložení absorbancí negativních sér Rozložení absorbancí pozitivních sér 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,35 absorbance

15 Imunoblot

16 Rychlé imunochromatografické testy

17