Elektroforéza proteinů krevního Praktické cvičení A1 Elektroforéza proteinů krevního séra Pavla Balínová

Elektroforéza Kationt – pohybuje se ke katodě (-) Aniont – pohybuje se k anodě (+) Amfoterní látka = může mít +/-/O náboj, záleží na podmínkách prostředí Princip: Látky mající rozdílnou hodnotu náboje mohou být separovány do několika frakcí ve vnějším elektrickém poli.

Elektroforéza sérových proteinů na agarozovém gelu Princip: Proteiny krevního séra mají záporný náboj při pH = 8,6 (pufr udržuje konstantní hodnotu pH) a při elektroforéze putují k anodě rychlostí, která je závislá na velikosti jejich náboje. Separované proteinové frakce jsou následně fixovány a obarveny.

Elektroforéza proteinů krevního séra Hydragel – agarózový gel Na tomto typu gelu je možno sérové proteiny separovat do 6 frakcí: Albumin α1 - globuliny α2 - globuliny β1 - globuliny β2 - globuliny γ - globuliny Obrázek byl převzat z http://www.sebia-usa.com/products/proteinBeta.html#

Hydragel 15/30 V laboratořích klinické biochemie se využívají gely, do nichž je možné aplikovat až 30 vzorků od různých pacientů. Obrázek byl převzat z http://www.sebia-usa.com/products/proteinBeta.html#

Denzitometrie Denzitometr je používán ke skenování intenzity zbarvení jednotlivých frakcí v gelu. Záznam z denzitometru je křivka obsahující 5 – 6 píků proteinových frakcí → kvantitativní analýza. Obrázek byl převzat z http://www.aafg.org

Elektroforéza jako skríningová metoda v záchytu některých onemocnění Normální stav Referenční hodnoty: Celkový protein 60 – 80 g/L Albumin 35 – 50 g/L α1-globuliny 1 – 4 g/L α2-globuliny 4 – 13 g/L β-globuliny 6 – 13 g/L γ-globuliny 6 – 15 g/L Obrázek byl převzat z http://erl.pathology.iupui.edu/LABMED/INDEX.HTM

Typ akutního zánětu α1 a α2 globuliny Odpověď akutní fáze zánětu se vyskytuje při zátěži nebo zánětech způsobených infekcí, zraněním nebo chirurgickým zákrokem normální nebo ↓ albumin ↑ α1 a α2 globuliny Obrázek byl převzat z http://erl.pathology.iupui.edu/LABMED/INDEX.HTM

Typ chronického zánětu Pozdní odpověď je spojena s chronickou infekcí (autoimunitní onemocnění, chronické onemocnění jater, chronická infekce, onkologické onemocnění) normální nebo ↓ albumin ↑α1 nebo α2 globuliny ↑↑ γ globuliny α1 α2 γ globuliny Obrázek byl převzat z http://erl.pathology.iupui.edu/LABMED/INDEX.HTM

Poškození jater - cirhóza γ globuliny Cirhóza může být způsobena dlouhodobým nadměrným požíváním alkoholu nebo virovou hepatitidou ↓ albumin ↓ α1, α2 a β globuliny ↑ IgA v γ-frakci Obrázek byl převzat z http://erl.pathology.iupui.edu/LABMED/INDEX.HTM

Nefrotický syndrom je prezentován dlouhodobou ztrátou proteinů s nízkou Mr (↓ albumin a IgG – jsou filtrovány v ledvinách do moče) retence proteinů s vysokou Mr (↑↑ α2-makroglobulin a β globuliny) α2 β globuliny Obrázek byl převzat z http://erl.pathology.iupui.edu/LABMED/INDEX.HTM

Paraproteinémie Paraprotein je typ patologického proteinu nalézaného v krvi při benigní monoklonální gamapatii (leukémie) a mnohočetném myelomu. Tento imunoglobulin je syntetizován patologicky zvrhlým klonem β-lymfocytů. Paraproteiny se mohou nacházet v různých pozicích: mezi α-2 a γ-frakcí. ostrý proužek paraproteinu Obrázek byl převzat z http://erl.pathology.iupui.edu/LABMED/INDEX.HTM