Klinická cytogenetika - metody

Slides:



Advertisements
Podobné prezentace
Vítejte ve světě buněčného cyklu
Advertisements

Získané chromozomální aberace
Odd. lékařské genetiky FN Brno, pracoviště DN
Preimplantační genetická diagnostika
Detekce proteinů na preparátech Histochemie. Metody detekce – vazba cílového proteinu Imunologické; primární protilátky sekundární protilátky Imunologické;
1 Chromosom Milada Roštejnská Helena Klímová. Obsah Chromosom Stav chromosomů se během buněčného cyklu mění Eukaryotní DNA je sbalena do chromosomu Interfázový.
Lidský genom Lidé patří mezi DNA organismy Genom je předáván
Buněčný cyklus je cyklus, kterým prochází eukaryotická buňka od svého vzniku po další dělení doba trvání cyklu se nazývá generační doba buněčný cyklus.
Projekt HUGO – milníky - I
AV ČR, Mendelovo muzeum a Vereinigung zur Förderung der Genomforschung pořádají další ročník Mendel Lectures které se konají v Agustiniánském.
Klinická cytogenetika
Chromozóm, gen eukaryot
Darina Čejková Martina Dvořáčková Zuzana Schmidtová Zuzana Špicarová
GENETICKÉ PORUCHY V PATOLOGII
Klíčová slova Aneuploidie: monozomie, trizomie, polyploidie: triploidie, tetraploidie, Downův sy, Edwardsův sy, Patauův sy, Turnerův sy, Klinefelterův.
Preimplantační genetická diagnostika Oddělení lékařské genetiky FN Brno Gynekologicko - porodnická klinika Masarykovy univerzity v Brně.
Molekulární genetika.
Transkriptom.
(genové mutace, otcovství, příbuznost orgánů při transplantacích) RNA
Využití cytogenetických metod v reprodukční medicíně
RxFISH.
METODY TESTOVÁNÍ GENOTOXICITY
Buněčný cyklus MUDr.Kateřina Kapounková
Poškození genomu na cytogenetické úrovni
Reprodukce buněk Nové buňky mohou v současné etapě evoluce vznikat pouze dělením buněk již existujicích. Dělením buněk je zajišťována: Reprodukce jedinců.
F.I.S.H. hotovo.
Výukový materiál zpracován v rámci projektu EU peníze školám
IMUNOFLUORESCENCE MUDr. Zita Trávníčková
Význam cytogenetických vyšetření u solidních dětských tumorů
MLPA MULTIPLEX LIGATION-DEPENDENT PROBE AMPLIFICATION
MODULARIZACE VÝUKY EVOLUČNÍ A EKOLOGICKÉ BIOLOGIE
Základy klinické cytogenetiky II
Mutageneze/karcinogeneze seminář
Metodická základna molekulární patologie
Vývoj mikrosatelitních markerů (SSR) KBO/125 Jiří Košnar, katedra botaniky PřF JU, 2012 Kurz byl financován z projektu FRVŠ 1904/2012.
DNA diagnostika.
Microarray Martin Erdös.
PCR Polymerase Chain Reaction
DNA diagnostika II..
„AFLP, amplified fragment length polymorphism“
Chromozomální základ dědičnosti
Metody studia chromozomů, postnatální a prenatální cytogenetická diagnostika RNDr Z.Polívková Přednáška č. 437 –
Základy cytogenetiky Chromozomy a karyotyp člověka
2014 Výukový materiál GE Tvůrce: Mgr. Šárka Vopěnková Projekt: S anglickým jazykem do dalších předmětů Registrační číslo: CZ.1.07/1.1.36/
Chromozomální abnormality u nádorů
Praktikum z genetiky rostlin JS Genetické mapování mutace lycopodioformis Arabidopsis thaliana Genetické mapování genu odolnosti k padlí.
Mikročipy ..
Molekulární biotechnologie č.10a Využití poznatků molekulární biotechnologie. Molekulární diagnostika.
Ligázová řetězová reakce
SEKVENOVÁNÍ DNA. Jedna z metod studia genů Využití v aplikovaných oblastech molekulární biologie – např. medicíně při diagnostice genetických chorob.
Mikrocytogenetika Prenatální diagnostika VCA Renata Gaillyová LF MU 10/2006.
Nepřímá DNA diagnostika
Exonové, intronové, promotorové mutace
5. ročník Klinická genetika
Klinická cytogenetika
NÁZEV ŠKOLY: ČÍSLO PROJEKTU: NÁZEV MATERIÁLU: TÉMA SADY: ROČNÍK:
Reprodukce buněk Nové buňky mohou v současné etapě evoluce vznikat pouze dělením buněk již existujicích. Dělením buněk je zajišťována: Reprodukce jedinců.
Mutace.
NÁZEV ŠKOLY: ČÍSLO PROJEKTU: NÁZEV MATERIÁLU: TÉMA SADY: ROČNÍK:
IMUNOFLUORESCENCE MUDr. Zita Trávníčková
Ivana Eštočinová, Pavla Fabulová, Markéta Formánková
Dominika verešová Kateřina Sapáková
1. Regulace genové exprese:
Buněčný cyklus buněčný cyklus (generační doba) - doba mezi dvěma mitózami (rozdělení buňky na dvě dceřinné) - velmi variabilní, podle typu tkáně.
NUKLEOVÉ KYSELINY Dusíkaté báze Cukry Fosfát guanin adenin tymin
18b-Metody studia nukleových kyselin
Nátěr krve na skle Bourková L., OKH FN Brno.
Osnova 5.Přednáška Kvasinkový genom
37. Bi-2 Cytologie, molekulární biologie a genetika
Molekulární biologie (c) Mgr. Martin Šmíd.
Transkript prezentace:

Klinická cytogenetika - metody OLG FN Brno

Cytogenetické barvící metody Bandy=pruhy-části chromozomů, které jsou zřetelně odlišeny od sousedních segmentů za použití více metod Metody diferencující po celé délce: Q-pruhy: fluorescenční barvení, jasné pruhy=oblasti s DNA bohatou na AT, AT oblasti zvyšují fluorescenci, GC ji potlačují, nevýhoda metody-rychlé blednutí preperátů, foto G-pruhy: mechanismus nejasný, důl. role Giems. barviva, enzymat. působení trypsinu, afinita u histonů bohatých na arginin, DNA ani proteiny nemizí při působení trypsinu, trvalé preparáty R-pruhy: reverzní ke G, princip-vysoká teplota (85C), denaturace proteinů a DNA bohaté na AT, GC oblasti zůstávají v nativní konfiruraci (delece koncových úseků)

C-pruhy: barvení konstitutivního heterochromatinu, denaturace NaOH, Metody selektivní C-pruhy: barvení konstitutivního heterochromatinu, denaturace NaOH, vyplavení fragmentů DNA z chromozomu do roztoku 2xSSC NOR: barvení oblastí, které v interfázi tvoří jadérko (nukleolární organizátor jadérka)-mnohonásobné kopie genů pro rRNA, akrocentr. chr., AgNo3 SCE: výměny sesterských chromatid, reciproké výměny, nemění morfologii Ch. výměny v homologních místech, mechanismus neznámý, vznik během replik. DNA, vztah k reparaci DNA, nesouvisí se vznikem strukturních aberací inkukce: alkylačními činidly, UV zářením použití: citlivý indikátor mutagenů výskyt: Bloomův sy. princip metody: inkorporace BrdU 2x buněčný cyklus, afinita fluorescenčního barviva Hoechst 33258

FISH - fluorescenční in situ hybridizace Použití sondy komplementární ke sledovanému úseku DNA, denaturace, hybridizace Sondy značené: radioaktivně ( zač. 70. let ) fluorescenčně 1990 Typy sond: centromerické, telomerické , celochromozomové (malovací), genově specifické, multisondy, genomové Hodnocení: fluorescenční mikroskop počítačová analýza obrazu

Princip FISH

Typy sond Satelitní-hybridizace se satelitními sondami - centromerické  satelitní: centromery, tandemově se opakující monomer 171 bp (numerické aberace, interfázní jádra)  satelitní: pericentrické oblasti akrocentr. , tandemově se opakující monomer 68 bp (13,14,15,21,22,9) telomerické: specifické sekvence TTAGGG (telomer. delece PMR) Celochromozomové: hybridizují po celé délce chromoz. (translokace) Genově specifické: hybridizují jedinečné sekcence (mikrodelece, onko) Genomové: tvořeny celkovou DNA (CGH), detekce jen delecí a amplifikací, klon v 50%zastoupení, k upřesnění cílená FISH celochrom.

Modifikace metody FISH Sekvenční FISH: po sobě se opakující hybridizace na stejném preparátu (PGD) Multisondový systém: podložní sklo s 24 sondami ve 24 polích-mitozy Multicolor: vizualizace jednotlivých párů v oblišných barvách (24 specifických celochromozomových sond- obrazová analýza, pseudobarvy princip: kombinace 5 sond spektrálně se nepřekrývajících, postupné snímání obrazů a jejich syntéza požadavek: spec. software (pseudobarvy), komplexní hodnocení chromos. Aberací nevýhoda: sada úzkopásmových filtrů Spektrální karyotypování SKY: současná vizualizace všech chr. , emisní spektrum (Furierova transformace) výhoda: získání obrazu v 1 kroku, ekonomická úspora

mFISH: -X,+del(1p),t(2;15),+8,+8,-9,t(9;15),-10,- 11,+del(13q),+20,-22

t(2;13), t(4;8), t(6;16), t(8;11)

Nejnovější metody cenM-FISH: identifikace všech centromer současně centromerické sondy značené 5 různými fluorochromy použití: malé marker chromozomy MCB (multicolor banding): chromoz. charakterizovány barevnými pruhy po celé délce