ZÁKLADY BARVENÍ MUDr. Filip Wagner Ústav histologie a embryologie Lékařská fakulta UP v Olomouci

Důvody barvení preparáty (tkáňové řezy) se zpravidla prohlížejí ve světelném mikroskopu jednotlivé části tkáně (struktury) se liší svou optickou lomivostí jen minimálně, nelze tyto struktury ve světleném mikroskopu prakticky rozeznat řezy je tedy nutné obarvit vhodnými barvivy (současně využíváme různé afinity různých barviv k jednotlivým tkáním, buňkám a částem buněk prohlížet nebarvené preparáty je možné jen za určitých podmínek ve speciálních mikroskopech (např. s použitím fázového kontrastu)

Druhy barviv (1) základní dělení barviv je na zásaditá a kyselá struktury tkání a buněk se liší podle toho, kterými barvivy se barví, označují se potom jako bazofilní, eosinofilní (oxyfilní) nebo neutrofilní (hetorofilní) O neutrofilii hovoříme u struktur, které se barví jak slabě kyselými (eosinofilními), tak slabě zásaditými (bazofilními) barvivy bazofilní je např. jaderný chromatin nebo bazofilní granula eosinofilní je např. vlákno příčně pruhovaného svalu kosterního neutrofilní jsou např. neutrofilní granula bílých krvinek

Druhy barviv (2) podle původu se histologická barviva dělí na přirozená a umělá přirozená barviva jsou extrakty rostlinného nebo živočišného původu (např. šafrán) barviva umělá (syntetická) jsou látky, které se vyrábějí „chemickou cestou“, patří mezi ně například anilinová barviva

Druhy barvení barvit lze za živa (přísně vitální barvení) po smrti vpravením barviva do čerstvé tkáně (supravitální barvení) fixované tkáně v řezech nebo in toto (celý blok tkáně vkuse)

PŘEHLEDNÁ BARVENÍ základní přehledné barvení, které se používá v histologii je barvení hematoxylin – eosinem další přehledná barvení jsou Weigert van Gieson azan oranž-eozin a toluidinová modř (Dominici) Massonovy trichromy

Přehledné barvení hematoxylin – eozin odparafinování (xylen, alkohol, voda) barvení hematoxylin barvení eosinem

Barvící sady

Barvící automat

příčně pruhovaný sval kosterní hematoxylin - eosin

štítná žláza hematoxylin - eosin

Zamontování preparátu hotový histologický preparát se pro prohlížení a k funkci trvalého preparátu montuje do montovacích médií a překryje krycím sklem běžným montovacím médiem je Entellan, před zamontováním do Entellanu se tkáň odvodní! existují i s vodou mísitelná montovací média např. Aquatec

Archivace sklíček – trvalých preparátů