Darina Čejková Martina Dvořáčková Zuzana Schmidtová Zuzana Špicarová Možnosti fluorescenční hybridizace in situ při detekci Ph chromozómu u pacientů s chronickou myeloidní leukémií Darina Čejková Martina Dvořáčková Zuzana Schmidtová Zuzana Špicarová

Chronická myeloidní leukémie (CML) myeloproliferativní nádorové onemocnění vzniká neoplastickou transformací pluripotentní kmenové buňky 3 stádia: chronická fáze, fáze akcelerace a blastický zvrat

Philadelphský chromozóm cytogentický marker CML 60. léta 20. století Nowell a Hungerford vzniká reciprokou translokací t(9;22)(q34;q11) fúzní gen BCR/ABL chimérický protein s tyrozinkinázovou aktivitou

Philadelphský chromozóm

Translokace t(9;22)

Philadelphský chromozóm 85% pacientů s CML je Ph+ z toho 5 - 12% variantní Ph chromozóm - t(1;9;22), t(8;9;22), t(9;12;22) 45% pacientů s variantním Ph chromozómem delece v sousedství zlomů 17% klasických Ph+ delece 5 - 10% pacientů s CML Ph-

Philadlephský chromozóm blastický zvrat je provázen sekundárními genomovými přestavbami: +8, i(17q), +19, extra Ph maskovaný Ph chromozóm: nelze identifikovat Ph chromozóm, ale fúzní gen BCR/ABL je přítomen

Stanovení Ph chromozómu G-pruhování Southern blotting Northern blotting Western blotting PCR RT-PCR FISH

Fluorescenční in situ hybridizace (FISH) interfázní FISH (I-FISH) metafázní FISH (C-FISH) hypermetafázní FISH (HM-FISH) dual color FISH (D-FISH) four color FISH (F-FISH) multi color FISH (M-FISH)

D-FISH 2 odlišně zbarvené sondy (červená, zelená) vzniká fúzní signál (žlutá) normální buňky 2 zelené a 2 červené signály Ph+ červený, zelený a fúzní žlutý signál snížení falešné pozitivity - extrasignál

D-FISH s extrasignálem snížení falešné pozitivity sondy překrývající místa zlomu BCR v případě Ph+ zelený žlutý a 2 červené signály

D-FISH signál-segregační strategie vysoká citlivost nízká falešná pozitivita sondy hybridizují s oblastmi sousedícími s geny BCR a ABL normální buňky 2 červené a 2 zelené signály Ph+ červený, zelený a 2 žluté signály

D-FISH signál-segregační strategie

F-FISH sondy hybridizují s oblastmi sousedícími s geny BCR a ABL každá sonda má jinou barvu (červená, modrá, zelená, žlutá) normální buňka: 2 signály žlutá/zelená a 2 signály červená/modrá Ph+ všechny čtyři varianty

F-FISH

M-FISH