Laboratorní metody 2 Kurs Imunologie II
Etiologická diagnostika infekčních chorob Průkaz původce choroby kultivační průkaz mikroskopický průkaz průkaz antigenů či nukleové kyseliny Průkaz reakce imunitního systému průkaz protilátek proti původci - sérologie průkaz specifických Th1 lymfocytů
? Základní problém Antigen Imunitní systém Protilátky Imunologie Mikrobiologie Antigen ? Imunitní systém Protilátky
Základní teze místo průkazu původce nákazy prokazujeme reakci části imunitního systému nevíme, zda imunitní systém reaguje dle našich představ (interpretační problémy nevíme, zda metoda zachycuje to, co hledáme (technologické problémy)
Schéma tvorby protilátek
Vliv složení antigenu
Nepřímá („bystander“) aktivace cytokinový signál a částečná aktivace receptorů může aktivovat B lymfocyty s jinou specificitou produkce protilátek proti jinému agens než které vyvolalo onemocnění
Schéma tvorby protilátek
Revmatoidní faktor Autoprotilátky proti vlastním IgG (převážně ve třídě IgM) mohou vyvolávat falešně pozitivní nález zejména IgM proti danému agens nutná pozitivita IgG frekvence v běžných vzorcích cca 1 %
Revmatoidní faktor (schéma)
Vyšetření avidity protilátek vychází z afinní maturace protilátek během sekundární odpovědi přináší stejnou informaci jako vyšetření IgM/IgG (isotypový přesmyk) nejednoznačné výsledky
Falešně negativní výsledky vyšetření je provedeno v začátcích rozvoje choroby pro imunitu k danému mikrobu nejsou protilátky podstatné mikrob napadá buňky imunitního systému pacient trpí poruchou tvorby protilátek vznik imunokomplexů
Falešně pozitivní výsledky protilátky přetrvávají roky či celoživotně u gravidních žen a u pacientů s postižením jater či celkovým metabolickým rozvratem protilátky se mohou začít tvořit i při reakci imunitního systému na jinou infekci (nepřímá aktivace) přítomnost revmatoidního faktoru
Vyšetřovací metody antigen - určuje specificitu metody detekční systém - určuje citlivost (sensitivitu) metody
Aglutinace - princip
Aglutinační metody Výhody robustnost nízká cena Nevýhody nerozliší třídy protilátek nižší citlivost
Komplement-fixace - princip
Komplement-fixační metoda Výhody nízká cena Nevýhody nestandardnost nerozliší třídy protilátek pracnost
ELISA - princip
Reakce se značenou protilátkou Výhody citlivost rozlišují třídy protilátek automatizovatelnost Nevýhody vyšší cena
Blokování účinku antigenu tato skupina je velmi nesourodá, proto nelze jednoduše shrnout její výhody a nevýhody
Průkaz specifických Th1 lymfocytů (QuantiFERON®) inkubace T-lymfocytů se specifickým antigenem změření hladiny interferonu-γ standardním ELISA testem
Praktické provedení indikace odběr krve do tří zkumavek (spec. ag., pos. kontrola, neg. kontrola) rychlý transport do laboratoře inkubace 24 hod. při 37 °C uchování vlastní provedení testu