Imunofenotypizace lymfatických uzlin D. Starostka, M. Bílý, K. Klaricová, I. Ondrová,, M. Wróbel, L. Novosadová Oddělení klinické hematologie Nemocnice s poliklinikou Havířov

Možnosti laboratorního zpracování lymfatických uzlin Cytomorfologie Cytochemie a imunocytochemie Histologie Imunohistochemie Imunofenotypisace buněčných suspensí Cytogenetika Molekulární biologie Mikrobiologie

Postup zpracování lymfatické uzliny Transport vzorku z operačního sálu v gáze zvlhčené pufrem PBS Zhotovení otisku na sklíčko k cytologickému vyšetření Rozstříhání vzorku na drobné části do malého množství PBS Mechanická desintegrace Filtrace Stanovení buněčnosti suspense na hematologickém analyzátoru Měření na průtokovém cytometru

Cíle imunofenotypizace Hematopoetické buňky (CD45+), nebo CD45- elementy Zastoupení jednotlivých lymfoidních linií Přítomnost monoklonality Charakteristický imunofenotyp

Panel pro imunofenotypizaci lymfoproliferací na OKH NsP Havířov Panleukocytární marker : CD45 T – markery : CD 3, CD 4, CD 8, CD 5, CD 7, CD 2, CD 1 , TCR B – markery : CD 19, CD 20, CD 21, CD 22, CD 23, CD 25, CD 38, CD 11c, CD 79b, FMC 7, CD 40, CD 28, CD 103, CD 138 NK – markery: CD 16, CD 56 Povrchové, event. intracytoplazmatické imunoglobuliny : těžké řetězce IgG, IgM, IgA, IgD lehké řetězce kappa a lambda

Imunofenotyp u chronických B - lymfoproliferací

Úskalí přípravy a měření vzorků a interpretace výsledků Odběr uzliny Konsistence uzliny Způsob desintegrace Potenciální nereprezentativnost vyšetřované populace Způsob lýzy erytrocytů Gateování

Problém: gate

Diagnostický souhrn 1. Iniciály, pohlaví, věk FCM Histologie Cytologie Konečná dg. O.K., ž, 46 B-NHL, v.s. FL (CD10+) FL, grade I NHL, v.s. FL FL P.Š, m, 44 J.M., ž, 43 B-NHL, v.s. LPL Extramedulární nediferencovaný plasmocytom uzliny NHL, v.s. LPL LPL J.P., m, 72 B-NHL, FL ?? (CD10 u 30% bb.) DLBCL se značnou příměsí T-lymfocytů NHL DLBCL E.S., m, 51 T-lymfocytární predominance (80%), oj. neklonál. B-lymfocyty T-cell rich DLBCL Nejasný nález V.S., m, 68 B-NHL, v.s. FL NHL (FL ?, MZL ?) O.K., ž, 48 A.H., ž, 75 B-NHL - LPL J.L., m, 55 B-NHL, DLCL ?, FL ? DLCL L.K., m, 64 B-CLL, Matutes 3/5 B-CLL, prolymfocytární a paraimunoblastická transformace Richterova transformace B-CLL Richterova transformace B-CLL

Diagnostický souhrn 2. Iniciály, pohlaví, věk FCM Histologie Cytologie Konečná dg. M.Z., m, 56 V.s.monoklonální B-populace, nejednoznačný nález Dif.dg. reaktivní hyperplasie vs. centroblastický B-NHL DLCL Nejasný stav, t.č. monoklon. lymfocytóza nejist. významu G.H., ž, 26 T-lymfocytární predominance (CD4:CD8 = 2.1:1) Hodgkinův lymfom, NS Hodgkinův lymfom V.B., ž, 33 (CD4:CD8 = 4.5:1) L.K., m, 70 (CD4:CD8 = 1.1:1) Hodgkinův lymfom, LP D.B., ž, 25 (CD4:CD8 = 9:1)

Diagnostický souhrn 3. Iniciály, pohlaví, věk FCM Histologie Cytologie Konečná dg. F.T., m, 56 T-lymfocytární predominance (CD4:CD8 = 7:1) Reaktivní změny Reaktivní lymfadenitida M.M., ž, 15 (CD4:CD8 = 3:1) Sarkoidosa K.S., ž, 75 Pouze 4% CD45+ buněk Metastasa malobuněčného karcinomu Metastasa karcinomu L.L., m, 68 (CD4:CD8 = 1.8:1) Metastasa nízce diferencovaného karcinomu Z.F., m, 58 Pouze 7% CD45+ buněk

Kasuistiky – klinická data Kasuistika č. 1: Pacientka O.K., 46 let. Multilokulární lymfadenomegalie s predilekční intraabdominální masou. Leukocytosa (35 x 109/l) s absolutní lymfocytosou (0.70 numfr.). Kasuistika č. 2: Pacientka J.M., 43 let. Sjögrenův syndrom. Během hospitalisace pro bronchopneumonii zjištěna isolovaná cervikální lymfadenomegalie. Sérový paraprotein IgM. Kasuistika č. 3: Pacient L.K., 64 let. B-CLL s malým klonem v periferní krvi (leukopenie), nodulární typ postižení KD. Po půlročním sledování masivní rychle narůstající cervikální lymfadenomegalie („býčí šíje“). Klinické podezření na histologickou transformaci B-CLL v high-grade lymfoproliferaci.

Kasuistika č. 1 - cytologický nález

Kasuistika č. 1 - imunofenotypisace lymfatické uzliny

Kasuistika č. 1 - rozdíly v imunotypu lymfomových buněk uzliny, KD a PK Lymfatická uzlina 48,0 % Kostní dřeň 23,4 % Periferní krev 6,0 %

Kasuistika č. 2 - cytologický nález

Kasuistika č. 2 - imunofenotypisace lymfatické uzliny

Kasuistika č. 3 - cytologický nález

Kasuistika č. 3 - imunofenotypisace lymfatické uzliny

Závěry Rychlá, citlivá a v mnoha případech diagnostická metoda umožňující v závažných případech bezprostřední léčbu Spojení s cytologií otiskového preparátu zvyšuje diagnostickou výtěžnost Odlišení uzlin postižených lymfoproliferacemi od metastatických uzlin (negativita CD45 na metastatických buňkách) Přesná specifikace B- non-hodgkinských lymfomů (B-NHL) podle charakteristického imunofenotypu U non-hodgkinských lymfomů (NHL) vysoký stupeň souladu mezi histologickou diagnózou a typizačním nálezem U Hodgkinova lymfomu vyšetření problematické