Imunofluorescence Nepřímá Přímá slouží k průkazu protilátek (Ab) slouží k průkazu antigenů (Ag) protilátka proti Ab+ barvička Ab+ fluorescenční barvička (hotová) sérum (IgG) sérum (Ag) Ag (hotový)
Imunofluorescence Úkol 1
ELISA I. (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) Slouží k průkazu antigenů i protilátek
ELISA k průkazu antigenů změna barvy + - Substrát Ab značená enzymem Sérum s Ag Sérum bez Ag Ab vázaná v důlku
ELISA II. – průkaz protilátek Prokazujeme třídy protilátek – IgM, IgA, IgG !!! IgM a IgA jsou znakem akutní infekce IgG obecně = prodělané infekce, ale !! existují nízkoavidní IgG – vazba těchto protilátek v reakci není pevná, lze ji rozrušit ureou (výskyt v časnější fázi infekce)
ELISA k průkazu protilátek - obecně + - Substrát Ab proti protilátce značená enzymem Sérum s Ab Sérum bez Ab Ag na dně
ELISA k průkazu tříd protilátek – vazná (capture) + - Substrát Ab proti protilátce značená enzymem Ag (hotový) Sérum bez Ab/jinou Ab než hledanou Sérum s Ab (IgM/IgG) Ab proti IgM//IgG vychytává všechny IgM/IgG ve vzorku
Westernblot (k průkazu Ab) Příprava Ag ELFO gelová Rozštěpení DDS Ag Přesátí Rozstříhání Proužky
Westernblot Vazba Ab na Ag + sérum s protilátkami (Ab) OspC + sérum s protilátkami (Ab) Hotový proužek s Ag (BmpA, OspC, p39 aj.) vzorek šablona Alespoň 2 proužky shodné se šablonou = výskyt protilátek Výjimka:pl proti OspC u IgM stačí pl proti vlsE u IgG 1proužek
Šablona k úkolu č. 5 OspC je vysoce specifické jsou-li IgM proti OspC přítomny = akutní infekce, netřeba hledat IgM proti jiným antigenům