a) MONOCHROMATICKÉ A b) GRAMOVO BARVENÍ

elektronová mikroskopie světelná mikroskopie procházející zástin fázový fluorescence světlo kontrast imunofluorescence nativní preparát barvený preparát MIKROSKOPICKÉ METODY V MIKROBIOLOGII

elektronová mikroskopie světelná mikroskopie procházející zástin fázový fluorescence světlo kontrast imunofluorescence nativní preparát barvený preparát MIKROSKOPICKÉ METODY V MIKROBIOLOGII

Barvený preparát má největší význam v bakteriologii  hodnocení morfologie, velikosti a uspořádání bakterií fixace preparátu (usmrcování bakterií)  mrtvé mikroorganismy přijímají barviva lépe teplem - mikrobi s pevnou buněčnou stěnou chemicky - šetrnější  prvoci

1a) MONOCHROMATICKÉ BARVENÍ

je pouze orientační poskytuje informace o velikosti, tvaru a seskupení mikrobů informace o vzájemných kvantitativních poměrech jednotlivých mikrobiálních morfotypů a ostatních elementů ve vyšetřovaném materiálu

Stručný postup barvení 1. fixace teplem 2. barvení methylenovou modří 1 minutu 3. oplach vodou 4. sušení 5. pozorování imerzí

1b) BARVENÍ DLE GRAMA

nejdůležitější barvící metoda v mikrobiologii důležité kritérium při klasifikaci bakterií umožňuje rozlišení mikrobů na skupinu Gram-pozitivních Gram-negativních

Proč je to tak důležité??! G+ a G- bakterie se liší: biologickými vlastnostmi (toxicita, antigenicita) citlivostí na antibiotika a chemoterapeutika z klinického hlediska je významné pro cílenou léčbu antibiotiky

Odlišná barvitelnost je způsobena rozdíly v chemické struktuře bakteriální stěny: Buněčná stěna gram-pozitivních bakterií „silnější“ polysacharidy (peptidoglykan, kyseliny teichoové) aminokyseliny (tetrapeptidy, spojovací můstky) popř. bílkoviny (protein M, protein A)

Odlišná barvitelnost je způsobena rozdíly v chemické struktuře bakteriální stěny: Buněčná stěna gram-pozitivních bakterií „silnější“ polysacharidy (peptidoglykan, kyseliny teichoové) aminokyseliny (tetrapeptidy, spojovací můstky) popř. bílkoviny (protein M, protein A)

Odlišná barvitelnost je způsobena rozdíly v chemické struktuře bakteriální stěny: Buněčná stěna gram-negativních bakterií „tenčí“ lipidy (rozpustnost v alkoholu) polysacharidy (lipopolysacharidy, peptidoglykan) bílkoviny

Postup barvení

Postup barvení fixace teplem krystalová violeť 20 s Lugolův roztok 20 s aceton-alkohol 10 – 20 s oplach vodou safranin 30 – 60 s oplach vodou osušení prohlížení imerzním objektivem

Hodnocení preparátu nemikrobiální elementy - epitelie - leukocyty - erytrocyty (četnost) - buněčný detritus mikrobiální elementy - G+ koky - G- koky - G+tyčinky - G- tyčinky - ostatní – kvasinky, plísně příp. prvoci Při hodnocení mikrobů popisujeme četnost, G+ nebo G-, tvar, uspořádání, velikost

Streptococcus sp

Staphylococcus sp.

Staphylococcus v hemokultuře

Clostridium sp.

Corynebacterium sp.

Aktinomyces sp.

Campylobacter

Neisseria sp.

Bacteroides sp.

enterobakterie s pouzdrem (chrání bakterie před imunitním systémem těla)

Kvasinky (G+)