Nádorová imunoterapie založená na instalaci ligandů fagocytárních receptorů na povrch nádorových buněk Jan Ženka Katedra medicínské biologie PřF JU České.

Prezentace na téma: "Nádorová imunoterapie založená na instalaci ligandů fagocytárních receptorů na povrch nádorových buněk Jan Ženka Katedra medicínské biologie PřF JU České."— Transkript prezentace:

1 Nádorová imunoterapie založená na instalaci ligandů fagocytárních receptorů na povrch nádorových buněk Jan Ženka Katedra medicínské biologie PřF JU České Budějovice

2 Inspirace: SR/CR myši –Zheng Cui, 1999 SR – spontaneous regresion CR – cancer resistant neutrofily, makrofágy, NK buňky …… ROZPOZNÁNÍ LIKVIDACE!!! SR/CR myši ?? 15% lidí : rozety granulocytů, prosinec-březen, stres - NE !? Pomoc při rozeznání PAMPs na nádorech

3 CO? - ligandy spojené s fagocytozou laminarin (Dectin-1) manan (MR, MBL – iC3b) formylmetioninové peptidy (FPR) JAK? - i.t. aplikace kotvení na nádorové buňky - BAM (DOPE), SMCC PROČ? - 1/ fagocytární ligandy musejí být kotvené 2/ nasměrování fagocytárního ataku Synergie se stimulací TLR – mohutná zánětlivá infiltrace s následným nasměrováním fagocytů na nádorové buňky s instalovanými ligandy fagocytárních receptorů

4 Phagocytic ligands: Laminarin - BAM, DOPE, SMCC Mannan - BAM, DOPE, SMCC f-MLF - BAM, DOPE, SMCC * P ≤ 0,05 * * P ≤ 0,01 * * * P ≤ 0,005 * * * * * P ≤ 0,001 compared to control (PBS) Melanom B16-F10/myš

5 Úkoly:  Kotvení komplexních PAMPs  Náhrada LPS  Studium mechanismů

6 Kotvení komplexních PAMPs Zymosan - BAM *P ≤ 0,05, **P ≤ 0,01, ***P ≤ 0,005, ****P≤ 0,001, *****P ≤ 0,0005, ******P ≤ 0,0001 compared to control (PBS) Δ P ≤ 0,05 compared to Zym-BAM

7 Gram negativní bakterie A - Stenotrophomonas maltophilia B - Serratia marcescens C - Serratia marcescens - oligolysine * P ≤ 0,05 * * P ≤ 0,01 * * * P ≤ 0,005 compared to control

8 Bakterie neobsahující LPS

9 Náhrada LPS Slabý efekt: - Flagellin - Monophosphoryl Lipid A (MPLA) - Imiquimod (R-837) Střední efekt: - beta glucan Silný efekt: - Resiquimod (R-848)

10 R-848/mannan-BAM

11 R-848/mannan-SMCC + Listeria monocytogenes + POLY I:C

12 A: L.m.-SMCC + man-SMCC D: R-848 + man-SMCC B: L.m.-SMCC + R-848 + man-SMCC re (1/5) E: R-848 + POLY I:C + man-SMCC C: L.m.-SMCC + R-848 + POLY I:C + man-SMCC (re 0/5) F: PBS (control)

13 Studium mechanismů Silná granulocytární infiltrace následovaná makrofágy (průtoková cytometrie, histologie)

14 Neutrophily + B16-F10 melanomové buňky

15 Neutrophily + B16-F10 melanomové buňky (frustrovaná fagocytóza) Mannan-BAM covered melanoma cells Laminarin-BAM covered Melanoma cells PBS (control)

16 Frustrovaná fagocytoza, f-MLFKK-BAM (ELMI)

17 Makrofágy (PMJ2R) + B16-F10 melanomové buňky

18 studenti: VŠ: Hana Maršíková prof. RNDr. Jan Kopecký, CSc. (PřF JU, Č.Budějovice) Magdalena Čechová RNDr. Tereza Janotová (PřF JU, Č.Budějovice) Veronika Maierová Mgr. Jaroslava Lieskovská, Ph.D. (PřF JU, Č.Budějovice) Marie Auerová RNDr. Marie Jalovecká, Ph.D. (PaÚ AVČR, Č. Budějovice) Ivana Švecová RNDr. Jiří Salát, PhD (VÚVL, Brno) Pavlína Bruzlová MUDr. Katarína Lukáčová (Nemocnice Č. Budějovice) Zuzana Kumžáková RNDr. Marie Horká, PhD (IACH AVČR, Brno) Štěpánka Čunátová Zuzana Vlčková Veronika Caisová Petra Rozsypalová Nikol Vácová Markéta Wachtlová Andra Vieru Simona Glaserová Hana Husníková Julie Fáberová Markéta Kovářová Petra Sváčková Adéla Jačková Denisa Sváčková Eva Waldmannová

19 Terapeutika: 1/ TCEP: Tris(2-carboxyethyl)phosphine (Sigma) LD50, dermální, 3000 mg/kg, krysa

20 2/ Heat Killed Listeria monocytogenes (InvivoGen) OSHA Hazards: No known OSHA hazards. (Occupational Safety & Health Administration) Studována jako adjuvans v 14 klinických studiích 3/ Resiquimod (Tocris) 1-[4-Amino-2-(ethoxymethyl)-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-1-yl]-2-methylpropan-2-ol 21 klinických studií, z nich 2 ukončené, lokální aplikace

21 4/ POLY I:C (Sigma) 320 klinických studií včetně jedné dokončené 5/ manan (Sigma) polymer manozy (Mw 30 – 60 000) Podle směrnice (ES) č. 1272/2008 není nebezpečnou látkou ani směsí. Tato látka není při hodnocení podle směrnice 67/548/EHS nebezpečná.

22 6/ SMCC (Thermo) Succinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate To the best of our knowledge, the toxicological properties of this product have not been thoroughly investigated (Thermo).

23 LátkaCena látky Množství na jednu terapeutickou dávku Cena jedné terapeutické dávky (Kč) Cena terapie jedné myši (Kč) TCEP 2g – 4400 Kč0,7 mg1,518 R-848 50 mg 12500 Kč0,025 mg6,2575 POLY I:C 25 mg 5800 Kč0,025 mg5,869,6 Listeria monocytogenes 10 10 3000 Kč50 mil.15180 Manan 1 g 9000 Kč0,625 mg5,62567,5 SMCC 50 mg 3000 Kč0,005 mg0,33,6 Vyléčení jedné myši: Celkem 413,7 Kč

24 Děkuji za pozornost