Strukturní analýza proteinů pomocí rentgenové difrakce Jan Hrach, Veronika Mašková
Osnova Teoretický úvod Vlastní práce Závěr Proteiny Krystalizace Difrakce Vlastní práce Závěr
Proteiny složené z aminokyselin základ živých organismů funkce zásobní katalytická (enzymy) regulační (hormony) obranná transportní (hemoglobin) stavební 1967 vyřešena první struktura enzymu lysozym
Krystalizace difuzní metody metoda visící kapky metoda sedící kapky v krystalizační kapce je menší koncentrace roztoku než v rezervoáru difúze par z kapky do rezervoáru růst koncentrace roztoku v kapce A – krycí víčko B – krystalizační kapka C – rezervoár D – matečný roztok
Růst krystalu
potvrzení krystalu proteinu metody destruktivní absorpce barviva dehydratace drcení nedestruktivní polarizace fluorescence pod UV zářením rentgenová difrakce
Difrakce Difraktometr na FZÚ AV v Cukrovarnické ulici w k j
Vlastní práce Cíle krystalizace proteinu sběr difrakčních dat řešení struktury proteinu
1. Krystalizace lysozym c = 120 mg/ml NaCl c = 1M octan sodný c = 0,1M polzethylen glykol 30%
Fázový diagram
protein 120 mg/ml 90 mg/ml 60 mg/ml 30 mg/ml 10 mg/ml 0,1M 0,2M 0,5M 1M 2M 3,6M NaCl
Potvrzení krystalu proteinu
Lovení a mražení krystalů velikost smyčky: 400 μm
2. Difrakce
Difrakční snímek více krystalů
3. Vyřešená struktura proteinu
Závěr Vypěstovali jsme krystaly proteinu a ověřili fázový diagram. Nasbírali jsme soubor difrakčních dat Vyřešili jsme strukturu lysozymu
Poděkování Ing. Monika Kučeráková (FÚ AV ČR) Ing. Jan Stránský (ÚMCH) Leona Švecová (KIPL FJFI) organizátoři Týdne vědy
Děkujeme za pozornost!