Praktikum - mikrobiologie

Úkol č.1: Pozorování kvasinek v tekutém živném roztoku Materiál : čerstvé droždí(kvasnice), cukr, Lugolův roztok Pomůcky: potřeby pro mikroskopování, kádinka, podložní a krycí sklíčka,která musí být vždy řádně omytá a odmaštěná, buničitá vata, kapátko Postup práce: Do kádinky nalijeme asi 50ml vlažné vody a přidáme čajovou lžičku cukru a nadrobíme malé množství kvasnic. Vše zamícháme a necháme stát při pokojové teplotě asi 15 min. po této době odebereme vzorek suspenze kapátkem, přeneseme jej na podložní sklíčko, přikryjeme krycím sklíčkem a pozorujeme preparát objektivy o postupně zvyšujeme zvětšení 20x, 40x případně 60x.

Definice mikroorganismů Mikroorganismy jsou velká a rozrůzněná skupina organismů žijících samostatně jako jednotlivé buňky nebo shluky nediferencovaných buněk.

„Mouchy se líhnou pouze z much“ (=Larvy much nevznikají z masa)

Nicolas Appert (1810): objev konzervace potravin na základě Spallanzaniho poznatků

Systém-3 základní nadříše: Archaebakterie Eubakterie bakterie sinice Eukaryota houby : plísně a kvasinky rostliny živočichové

Archaebakterie extrémní podmínky nejsou patogenní např. horké sirné prameny, solná jezera, … nejsou patogenní

Eubakterie pravé bakterie sinice

Živné půdy studium mikroorganismů – celé populace mnohé bakterie auxotrofní organismy agar – z ruduchy u JV pobřeží Asie a J Kalifornie (paní Hessová, Koch) tuhne při teplotě 45° Šikmé agary živné roztoky na Petriho miskách

Bakterie rostou v médiu o vhodném složení

Požadavky na médium – „ideální médium nejlépe vyhovující danému kmeni bakterie“ Médium: Prvky, živiny Zdroj energie Zdroj uhlíku Zdroj biogenních prvků Voda Růstové faktory

Typy médií Minimální - chemicky definovaná (bez biologických extraktů) Minerální - minimální médium, pouze z anorganických komponent a organického zdroje uhlíku nebo bez něj (=CO2) Komplexní - médium obsahující chemicky přesně nedefinovaný extrakt z biologických materiálů (např. silný hovězí vývar pro bakterie)

Různé typy očkování na Petriho misky

Metoda mikrobiologie Aseptická práce Čisté kultury Sterilizace

Izolace – ředění čisté kultury na misce Schéma izolace čisté kultury

Voda z bazénu

Aerobní, anaerobní, fakultativní, mikroaerofilní, aerotolerantní organismy

Růst bakteriální buňky

Nestejnoměrné dělení bakteriálních buněk

Doba zdvojení organismů (hod)

Velikost buněk prokaryot a eukaryot

Tvary bakteriálních buněk

Tvary buněk ve světelném mikroskopu

Tvary bakteriálních koloní

Další dělění bakterií : G+ a G- (podle typu buňěčné stěny) Grampozitivní bakteriie kolem cytoplazmatické membrány mají jednobuněčnou stěnu z peptidoglykanu Gramovo barvení – modrofialová barva Gramnegativní bakterie nad peptidoglykanovou buněčnou stěnou mají další membránovou strukturu Gramovo barvení – červená barva

Diferenciální Gramovo barvení: G+(modré) a G- buňky (růžové) pro srovnání v jednom preparátu

Grampozitivní bakterie

Gramnegativní bakterie

Četnost bakterií v různých prostředích

Hodnocení: Kvasinková buňka je snadno pozorovatelná pod mikroskopem Hodnocení: Kvasinková buňka je snadno pozorovatelná pod mikroskopem. Při dostatečném zvětšení uvidíme jednotlivé buňky kulovitého nebo oválného tvaru i jejich shluky. Pokud je droždí čerstvé můžeme pozorovat i dělení buněk pučením Další pozorování:U kvasinek můžeme pozorovat struktury uvnitř buňky: glykogen- zásobní polysacharid, který nám poslouží k určení fyziologického stavu buňky. Preparát si připravíme tak, že na mírně zaschlou suspenzi kvasinek na podložním skle kápneme přiměřené množství Lugolova roztoku, přikryjeme krycím sklíčkem a pozorujeme. V jednotlivých kvasinkách uvidíme zřetelně odlišené červenohnědé části obsahující glykogen a přítomné bílkoviny budou zbarveny žlutě. Kvasinky v dobrém fyziologickém stavu-tedy mladé buňky obsahují více bílkovin- uvidíme je tedy žlutě. Starší kvasinky mají naopak více glykogenu a proto jsou uvnitř hnědočervené

Kvasinky – saccharomyces cerevisae

Tvary kolonií kvasinek

Úkol č.2.: Pozorování bakterií – trvalé preparáty Pomůcky: mikroskop, pomůcky k mikroskopovaní, TP Postup práce: Pod mikroskopem pozorujte různé tvary bakterií a zakreslete do sešitu. Dále pozorujte G+ a G- bakterie.