Efekt IL-12 a IL-15 na buněčné funkce NK buněk pupečníkové krve čet. Martin Bortlík Centrum Pokročilých Studií 3. ročník

NK efektorová funkce sklon NK k apoptóze Bostik et al, J Immunol 2009 US National Library of Medicine Health News, Sat, 02/06/2010 náchylnost novorozenců k infekci snazší přístup trvalé přijetí štěpu méně závažná graft versus host reakceméně závažná graft versus host reakce Cave! Naivita UCB LY Úkol NK Úkol: in vitro „manipulace“ UCB a stimulace „dozrávání“ NK bb (IL-2-like cytokines) Cíl: Cíl: urychlit uzdravení pacientů přijímajících transplantát KB zvýšením resistence proti virální infekci a potlačením GVHD + (potenciální GVL) Figure 1 Figure 2 Figure 3

J Immunol Mar 15;182(6): Nat Rev Immunol Nov;5(11): “MISSING SELF” HYPOTÉZA Defekty novorozeneckých NK bb Dopad na imunitu  exprese CD57  lytické funkce  binding 2 target  ADCC  NK aktivity  virové replikace  produkce cytokinů (IFNg, TNFa)  maturace denritických bb Figure 5 Figure 4

+ heparin 20U/ml + IL-12 + IL-15 + IL-12; + IL-15 control Plasma ERY Ficoll - Hypaque MNC Bortlik 2012 density gradient centrifugace Ficoll - Hypaque Buněčná suspense Bortlik *10 6 /ml in RPMI-1640 Figure 6 A) Bortlík 2012 Figure 10 B)

TNF - alpha pg/ml INF - gamma

IL-12 & IL-15 FLOW CYTOMETRY VÝSLEDKY CD69 1,2% MFI: 15,4 84,1% MFI: 33,0 99,6% MFI:86,2 99,8% MFI:301,9 70,6% MFI: 19,7 90,7% MFI: 46,0 + IL-12; + IL-15 controlcontrol Granzym A Perforin

% exprese parametrů Mean fluorescence intensity

Klinická studie Císařský řez - konec 39 týdne – bez kontrakcí Spontánní porod Spontánní porod ukončený císařským řezem X preeklampsie, hypertenze, DM, gestační diabetes 3 skupiny vzorků (homogenní kohorta) Sbíraná data Množství zkoumané UCB Počet NK bb/ml Věk matky Kuřačka? BMI Parita Gestační stáří Hmotnost plodu pH UCB Apgar score

IL-12IL-15 (1) IL-12 i IL-15 významně zvyšují sekreci TNF-α i INF-γ v UCB NK bb IL-12IL-15 (2) IL-12 a IL-15 mají schopnost aktivovat NK bb a zvyšovat produkci perforinu a granzymu A IL-12IL-15 synergický efekt (3) Kombinace IL-12 & IL-15 vyústila v mohutnější míru odpovědi u UCB NK bb, než za použití cytokinů jednotlivě prokázán synergický efekt (4) Vyhodnocení statistických dat proběhne po ukončení testovací fáze (5/13) Naše nálezy mohou mít terapeutické uplatnění při návrhu cytokinové terapie u pacientů přijímajících pupečníkovou krev jako alternativu ke kostní dřeni.

FUTURE WORK IL-12IL-15  Test úrovně skutečné schopnosti zabíjet IL-12 a IL-15 stimulovaných NK bb proti K562 IL-12IL-15  Měření úrovně apoptózy u IL-12 a IL-15 stimulovaných NK bb  Nalezení potenciálních korelací, jež by nám mohly naznačit vzájemné vztahy mezi průběhem porodu a následným vlivem na fetální NK bb Bortlik 2012

Děkuji za pozornost. Bortlik 2012